PITX1调控PDCD5参与胃癌化疗药物敏感性的研究

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目的:探讨PITX1表达水平与胃癌患者的预后之间的相关性;研究PITX1是否影响胃癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)与顺铂(cis-Dichlorodiammineplatinum,CDDP)的敏感性及其可能的靶基因。  方法:从The Cancer GenomeAtlas(TCGA)数据库中分析PITX1在胃癌组织中的表达。采用免疫组织化学的方法在两组相同的胃癌组织芯片中检测PITX1的表达模式,并统计分析PITX1的差异表达与胃癌患者预后之间的相关性。应用CCK-8法检测过表达PITX1的胃癌细胞系AGS、BGC-823对化疗药物5-FU和CDDP的敏感性变化,以及PITX1敲低表达的胃癌细胞系MCG-803和SGC-7901对5-FU和CDDP的敏感性变化。分析CHIP-seq数据中PITX1可能调控的下游与化疗耐药相关的基因,挑选凋亡相关基因PDCD5做进一步分析,RT-qPCR检测PITX1对PDCD5的转录调控。  结果: TCGA数据分析发现,与正常胃组织相比,PITX1在胃癌组织呈低表达模式;免疫组化结果显示,两组胃癌组织芯片中PITX1表达基本一致,根据两组PITX1阳性细胞百分比与阳性的强度之和计算PITX1表达的平均得分,将胃癌组织病例分为PITX1高表达组和低表达组。Kaplan-Meier(KM)方法用于分析PITX1表达水平高和低与胃癌患者术后预后之间的相关性,发现PITX1的表达水平与胃癌患者预后明显相关。细胞实验发现,过表达PITX1明显增加了胃癌细胞AGS和BGC-823对5-FU与CDDP的敏感性;敲低PITX1表达则减弱了胃癌细胞MCG-803和SGC-7901对5-FU与CDDP的敏感性。CHIP-seq数据分析显示,与PITX1结合的基因以参与细胞死亡和细胞凋亡过程相关的基因居多。凋亡相关基因PDCD5作为候选进一步研究发现,PITX1在转录水平调控PDCD5的表达。  结论:  1、TCGA数据库分析PITX1 mRNA在胃癌组织中呈低表达模式,提示PITXI在胃癌中可能起着抑癌基因的作用。PITX1表达水平与胃癌患者的预后不良具有相关性。  2、PITX1的表达影响胃癌细胞对化疗药物5-FU和CDDP治疗敏感性,可能是其通过影响胃癌细胞的凋亡造成的。  3、胃癌细胞中PDCD5的转录受PITX1的调控,但具体机制尚需进一步研究。
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