【摘 要】
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本研究以水产养殖行业常见的病原微生物为研究对象,基于课题组自主研发的荧光-光电记录式微生物检测仪器FORBIDTM微生物快速分析仪,探索病原微生物准确、高效的特异性检测策略,并构建了两种病原微生物的快速检测模式,为病原微生物快速检测提供了新的思路和方法。主要研究内容如下:(1)分别利用荧光和比色两种检测原理探究了大肠埃希氏菌和菌落总数的快速检测策略。针对靶标菌株进行特异性、准确度及灵敏度的检测评估
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本研究以水产养殖行业常见的病原微生物为研究对象,基于课题组自主研发的荧光-光电记录式微生物检测仪器FORBIDTM微生物快速分析仪,探索病原微生物准确、高效的特异性检测策略,并构建了两种病原微生物的快速检测模式,为病原微生物快速检测提供了新的思路和方法。主要研究内容如下:(1)分别利用荧光和比色两种检测原理探究了大肠埃希氏菌和菌落总数的快速检测策略。针对靶标菌株进行特异性、准确度及灵敏度的检测评估,并成功建立靶标菌株的检测标准曲线,将该检测策略应用到实际样本的检测中。实验结果表明,我们的检测策略可以实现10~0-10~6CFU/m L7个数量级跨度的靶标微生物超灵敏检测,并在大肠埃希氏菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌混合检测时表现出极好的特异性,将该策略应用于实际样本检测时仍获得了良好的准确度。本策略的检测结果与传统公认的平板计数方法相比,具有较高的准确性和稳定性;且操作流程简单、检测时间短,检测成本低。该策略的成功实现可以为病原微生物的检测提供新的思路。(2)探索了一种基于FORBIDTM微生物快速分析仪对大肠埃希氏菌和总大肠菌群同步检测的新模式,并进一步将其应用至水产养殖水质的检测中。通过靶标菌株建立标准曲线,进行灵敏度、线性范围分析以及准确度测试,并探索其在多种类型实际样本检测中的准确高效性和普适性。建立的检测方法可实现大肠埃希氏菌和总大肠菌群的同步检测,检测的灵敏度区间跨度为10~0-10~4CFU/m L,该方法与平板计数法的检测结果具有良好的线性相关关系,且在3份不同污染程度,8份不同基质以及5份野外样本的检测中均表现出极高的准确度。检测的优势为:灵敏区间广,准确度高,不需要提前预估样本污染程度;检测耗时短,20小时内可完成所有检测;一步法傻瓜式操作,降低了操作难度;两种指标同时检测,使检测成本低廉。该模式为水产行业病原微生物检测打开了新的思路,具有较高的推广应用价值。
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