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高致病性禽流感(Highly Pathogenic Avian Influenza, HPAI)自1878年在意大利首次暴发以来,已在世界范围内发生了20多次,每次暴发都造成了严重的经济损失和社会恐慌。目前有效治疗高致病性禽流感病毒(Highly Pathogenic Avian Influenza Virus)的药物比较少。本课题选择A/Tiger/Harbin/01/2002株简称(HAB/01)H5N1病毒感染MDCK细胞为活性筛选模型,通过细胞病变法(Cytopathic Effect,CPE)作为初步筛选的活性评价方法,对40种中草药进行体外活性筛选。首次发现了几种抗H5N1病毒作用显著的中草药。首先发现八仙草(Galium aparine L)有较强的抗H5N1病毒作用。通过活性追踪发现,八仙草的抗H5N1病毒活性成分集中在正丁醇25%~50%乙醇洗脱部位,抗病毒作用呈明显的效量依赖关系。八仙草为茜草科拉拉藤属一年生草本,该植物资源丰富,目前国内还没有开展相关的化学成分研究和开发。本课题通过生物活性跟踪并结合化学导向的研究路线,对八仙草抗H5N1病毒活性部位进行系统分离,综合运用多种分离手段对有效部位进行系统的分离纯化。分离得到33个单体化合物。通过理化测定和采用ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HMQC、HMBC、NOESY等波谱手段,鉴定了26个化合物。分别是:去乙酰车叶草酸(1),1-羟基-3-异戊烯基-2-萘甲酸甲酯-4-O-β-D-木糖苷(2),3-异戊烯基-2-萘酸甲酯-1,4-二-O-β-D-葡萄糖苷(3)1,3,6-三羟基-2-甲基蒽醌-3-O-α-鼠李糖(1→2)-O-β-D-葡萄糖苷(4),1, 3-二羟基蒽醌(5),7S,8R,8’R-(-)-落叶松脂醇-4,4’–二-O-β-D-葡萄糖苷(6)3′,4′,3,5,7-五羟基黄酮(7),3′,4′,5,7-四羟基黄酮(8),3′,5,7-三羟基黄酮(9),4′-甲氧基-5-羟基黄酮-7-O-α-鼠李糖(1→6)-β-D-葡萄糖苷(10),4′,5,7-三羟基黄酮-3-O-α-鼠李糖(1→2)-β-D-葡萄糖苷(11),4′-甲氧基-3′5,7-三羟基黄酮-3-O-α-鼠李糖(1→6)-β-D-葡萄糖苷(12),尿嘧啶(13),胞嘧啶(14),尿嘧啶核苷(15),胸腺嘧啶脱氧核苷(17),腺嘌呤核苷(18),对羟基苯甲酸(19),原儿茶酸(20),香草酸(21),咖啡酸(22),β-谷甾醇(23),β-胡萝卜苷(24),正十六烷酸(25),杜鹃花酸(26),其中(2)为新化合物。通过细胞病变法(Cytopathic Effect,CPE)对分离得到的部分化合物进行抗H5N1病毒活性评价,结果发现去乙酰车叶草酸(1)有明显的抗H5N1病毒活性,药物浓度为37.5μg/mL时,CPE结果为一个“+”,且有较好的剂量依赖关系。