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我国作为世界上最大的甘薯生产国,由于生产上长期采用无性繁殖,甘薯产量和品质受到病毒病的严重影响,甚至引起种性退化。种植脱毒种苗是目前防治病毒病提高甘薯产量最有效的措施之一。明确主要的甘薯病毒种类,建立灵敏高效的病毒检测技术在培育脱毒种苗中起至关重要的作用。华南地区是我国主要的甘薯产区之一,病毒病对甘薯的危害十分严重。本论文对华南地区三个省(区)十二个地区的甘薯病毒病进行调查和样品采集,运用小RNA深度测序技术和RT-PCR检测技术相结合的方法,鉴定出侵染华南地区甘薯的主要病毒种类,并建立同步检测7种甘薯病毒的多重RT-PCR检测技术,为脱毒甘薯种苗生产奠定技术基础。取得以下结果:1.对华南三省区12个甘薯种植区进行了病毒病调查。结果表明,各地甘薯均受到病毒病危害,田间病株率为1.6%~51.7%不等,症状通常表现为褪绿斑点、明脉、皱缩、紫色斑驳、花叶、卷叶等,以褪绿斑点、紫色斑驳为主。2.利用小RNA深度测序技术鉴定了华南地区主要甘薯病毒种类。在广州和湛江地区的13个混样中检测到9种甘薯病毒,包括7种RNA病毒:甘薯褪绿斑病毒(SPCFV)、甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯C病毒(SPVC)、甘薯G病毒(SPVG)、甘薯潜隐病毒(SPLV)、甘薯B1病毒(SPVB1)、甘薯B2病毒(SPVB2)和2种DNA病毒:甘薯卷叶病毒(SPLCV)、甘薯金脉病毒(SPGVV)。PCR/RT-PCR及其产物测序验证了小RNA深度测序的检测结果。3.采用PCR或RT-PCR技术对华南各地田间样品进行了病毒检测。根据小RNA深度测序鉴定的9种病毒以及文献报道的侵染我国甘薯的另外8种病毒设计特异引物,建立PCR或RT-PCR检测技术,在采自华南12个地区的209个田间样品中检出了13种病毒,除了上述小RNA深度测序技术鉴定的9种病毒外,还检出了甘薯轻斑驳病毒(SPMMV)、甘薯轻型斑点病毒(SPMSV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)。13种病毒的检出率从高到低依次为SPVB2(40.67%)、SPFMV(38.28%)、SPVC(30.14%)、SPVG(26.79%)、SPCFV(19.13%)、SPVB1(14.83%)、SPMSV(12.50%)、SPLV(8.13%)、SPGVV(6.22%)、SPMMV(4.31%)、SPLCV(4.31%)、CMV(2.87%)、TMV(0.96%),其中SPVB2、SPFMV、SPVG及SPVC为华南地区甘薯上的优势病毒种类。在209份样品中,仅62份样品为单一侵染,占总数的29.67%,其余为复合侵染,复合侵染率高达70.33%,说明华南地区甘薯病毒复合侵染严重。4.建立了同步检测7种甘薯病毒的多重RT-PCR检测方法。针对华南地区甘薯病毒的发生状况,在完善各病毒单重PCR/RT-PCR检测技术的基础上,探索了同步检测多种病毒的多重RT-PCR检测方法。首先根据马铃薯Y病毒属的SPFMV、SPVC、SPVG和SPLV基因组保守序列设计简并引物,试验筛选能够从单一病毒样品和复合病毒样品中有效扩增4种病毒靶标序列的引物对,再与SPCFV、TMV、CMV特异引物相结合,通过反应条件优化建立了四重RT-PCR检测体系,该检测体系可从7种病毒复合样品中扩增出大小分别为1100bp、900bp、600bp、300bp的PCR产物,在琼脂糖凝胶电泳中呈现4条清晰可辨的目的条带。该检测方法的建立,为脱毒苗的检测提供了便利,可显著降低检测成本且提高了检测效率。