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目的:通过免疫组织化学方法检测结直肠癌组织和相应切缘无瘤粘膜组织中CEACAM6、β-catenin和S100A4蛋白表达水平，并通过实时荧光定量聚合酶链反应(real time PCR)技术检测CEACAM6 mRNA的表达情况，分析CEACAM6、β-catenin和S100A4的表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系，并进行相关性分析，为进一步阐明结直肠癌发生发展机制提供理论依据，为结直肠癌患者的基因诊断、治疗以及蛋白表达提供有力帮助。
方法:
1.免疫组织化学法
1.1 选择唐山市工人医院2010年-2011年228例结直肠癌患者，收集患者术后癌组织及相应切缘无瘤粘膜石蜡包埋的标本，所有病例有完整资料，均经唐山市工人医院病理科确诊。
1.2 应用组织芯片技术制作组织芯片蜡块。
1.3 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色方法检测癌组织及相应切缘无瘤粘膜组织中CEACAM6、β-catenin和S100A4蛋白的表达。
2.real-time PCR收集2012年唐山市工人医院结直肠癌手术标本共20例，提取20例结直肠癌组织及其中10例切缘无瘤粘膜组织中的总RNA，采用real timePCR检测癌组织及相应切缘无瘤粘膜组织中CEACAM6 mRNA表达。
3.统计学方法
应用SPSS13.0统计软件对数据进行分析处理，阳性率的比较采用x2检验，相关性分析采用spearman检验，计量资料组间比较采用t检验，均以P＜0.05为差异有统计学意义。
结果:
1.CEACAM6蛋白在结直肠切缘无瘤粘膜及癌组织中的表达CEACAM6蛋白在结直肠切缘无瘤粘膜组织中和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为54.8％(125/228)和84.2％(192/228)，结直肠癌组织中CEACAM6蛋白表达的阳性率明显高于切缘无瘤粘膜组织，差异有统计学意义(X2=46.456，P＜0.001)。
2.CEACAM6蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系CEACAM6在结直肠癌中的表达阳性率与肿瘤的淋巴结转移及分期均密切相关，伴有淋巴结转移患者中CEACAM6表达阳性率为93.5％，明显高于无淋巴结转移患者的79.5％，差异有统计学意义(X2=7.556，P=0.006);Ⅲ/Ⅳ期的结直肠癌患者中CEACAM6表达阳性率为95.9％，明显高于Ⅰ/Ⅱ期患者的78.7％，差异有统计学意义(X2=11.017，P=0.001)，而与性别、年龄、肿瘤部位及组织学分型之间均无相关性(均P＞0.05)。
3.β-catenin蛋白在结直肠切缘无瘤粘膜及癌组织中的表达β-catenin蛋白在结直肠切缘无瘤粘膜组织中和结直肠癌组织中的异常表达率分别为61.0％(139/228)和83.3％(190/228)，结直肠癌组织中β-catenin蛋白表达的异常表达率明显高于切缘无瘤粘膜组织，差异有统计学意义(X2=28.386，P＜0.001)。
4.β-catenin蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系β-catenin在结直肠癌中的异常表达与肿瘤的淋巴结转移及分期均密切相关，伴有淋巴结转移患者中β-catenin异常表达率为94.8％，明显高于无淋巴结转移患者的77.5％，差异有统计学意义(X2=11.017，P=0.001);Ⅲ/Ⅳ期的结直肠癌患者中β-catenin异常表达率为94.5％，明显高于Ⅰ/Ⅱ期患者的78.1％，差异有统计学意义(X2=9.676，P=0.002)，而与性别、年龄、肿瘤部位及组织学分型之间均无相关性(均P＞0.05)。
5.S100A4蛋白在结直肠切缘无瘤粘膜及癌组织中的表达S100A4蛋白在结直肠切缘无瘤粘膜组织中和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为25.4％(58/228)和52.6％(120/228)，结直肠癌组织中S100A4蛋白表达的阳性率明显高于切缘无瘤粘膜组织，差异有统计学意义(X2=35.423，P＜0.001)。
6.S100A4蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系S100A4在结直肠癌中的表达阳性率与肿瘤的淋巴结转移及分期均密切相关，伴有淋巴结转移患者中S100A4表达阳性率为66.2％，明显高于无淋巴结转移患者的45.7％，差异有统计学意义（X2=8.628，P=0.003）;Ⅲ/Ⅳ期的结直肠癌患者中S100A4表达阳性率为67.1％，明显高于Ⅰ/Ⅱ期患者的45.8％，差异有统计学意义(X2=9.045，P=0.003)，而与性别、年龄、肿瘤部位及组织学分型之间均无相关性(均P＞0.05)。
7.CEACAM6、β-catenin和S100A4蛋白表达相关性分析经过spearman检验，在结直肠癌组织中CEACAM6和β-catenin(r=0.73,P=0.023),CEACAM6和S100A4(r=0.69,P=0.013),β-catenin和S100A4（r=0.81，P=0.018），两两均呈正性相关。
8.CEACAM6 mRNA在结直肠切缘无瘤粘膜及癌组织中的表达CEACAM6 mRNA在结直肠切缘无瘤粘膜组织中和结直肠癌组织中的相对表达量分别为0.006±0.0015和0.014±0.005，结直肠癌组织中CEACAM6的表达水平明显高于切缘切缘无瘤粘膜组织，差异有统计学意义(t=5.442，P＜0.001)。
9.CEACAM6 mRNA的表达与结直肠癌临床病理特征的关系CEACAM6 mRNA在结直肠癌中的表达水平与肿瘤的淋巴结转移及分期均密切相关，伴有淋巴结转移患者中CEACAM6表达水平为0.0190±0.00045，明显高于无淋巴结转移患者的0.0112±0.0015，差异有统计学意义（t=5.378，P＜0.001）;Ⅲ/Ⅳ期的结直肠癌患者中CEACAM6表达水平为0.0195±0.0045，明显高于Ⅰ/Ⅱ期患者的0.0115±0.0017，差异有统计学意义（t=5.595，P＜0.001），而与性别、年龄、肿瘤部位及组织学分型之间均无相关性(均P＞0.05)。
结论:
1.CEACAM6、β-catenin和S100A4在结直肠癌中高表达，表明三者在结直肠癌的发生过程中可能发挥了促癌作用。
2.CEACAM6、β-catenin和S100A4的表达与结直肠癌淋巴结转移及TNM分期有关，提示可能参与了结直肠癌的侵袭和转移过程。
3.CEACAM6、β-catenin和S100A4的表达呈正相关，表明三者在结直肠癌发病过程中可能存在协同作用。联合检测CEACAM6、β-catenin和S100A4可为结直肠癌的诊断提供帮助。