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目的：心血管疾病由于其发病率和病死率很高，已成为危害人类健康的头号杀手，而细胞能量代谢障碍又是引发心血管疾病的重要原因，寻求有效治疗细胞能量代谢障碍的药物，是当前研究的热点。寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)作为ATP合酶的一个重要亚基，在细胞能量代谢中发挥着重要作用。缺血预适应(IPC)对缺血心肌的保护作用与ATP合酶活性的升高有密切关系。本实验采用基因工程的方法克隆ATP合酶中的OSCP基因，并构建其真核表达载体，这为以后对该基因在真核细胞中过表达、蛋白活性的检测以及研究OSCP在细胞能量代谢、IPC中的作用奠定了基础。
方法：1.扩增大鼠OSCP基因：首先取SD大鼠脑组织50mg左右，依照Trizol试剂说明书中步骤提取总RNA。根据OSCP基因的开放阅读框设计合成一对引物。用RT-PCR方法扩增出编码OSCP基因的全长序列，分离纯化PCR产物。2.构建重组克隆载体pTA2-OSCP：将PCR产物与pTA2克隆载体连接，连接产物转化入E.coliJM109感受态细菌，摇菌扩增，提取质粒DNA，用EcoRI进行酶切鉴定，筛选出阳性重组质粒进行DNA序列测定，测序结果用GeneRunner软件分析。3.构建重组表达载体pEGFP-N1-OSCP：重组质粒pTA2-OSCP和真核表达载体pEGFP-N1分别经BglII/EcoRI酶切，然后通过T4连接酶连接，转化入E.coliDH50α感受态细菌，摇菌扩增，提取质粒DNA。经BglII/EcoRI酶切鉴定，筛选出阳性重组质粒进行DNA序列测定，测序结果用GeneRunner软件分析。
结果：1.OSCP基因的的RT-PCR扩增：总RNA的OD260nm/OD280nm为1.87，纯度符合实验要求；甲醛变性琼脂糖凝胶电泳结果表明所提总RNA的完整性好：琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR产物的长度约为700bp，与预期结果相符。2.重组克隆载体pTA2-OSCP的鉴定：重组克隆载体pTA2-OSCP经EcoRI限制性内切酶鉴定，得到约3000bp的线性片段和约700bp的插入片段，与预期结果相符；选取阳性克隆载体进行测序，与已公布的大鼠OSCP基因序列比较分析，同源性为100％。证明pTA2-OSCP重组克隆载体构建成功。3.重组表达载体pEGFP-N1-OSCP的鉴定：重组表达载体pEGFP-N1-OSCP经BglII/EcoRI双酶切得到约为4700bp的线性片段和约700bp的插入片段，与预期结果相符；选取阳性重组表达载体进行测序分析，与已公布的大鼠OSCP基因序列比较，同源性为100％。证明重组表达载体pEGFP-N1-OSCP构建成功。
结论：1.通过RT-PCR扩增出了大鼠OSCP基因。2.重组克隆载体pTA2-OSCP构建成功。3.重组真核表达载体pEGFP-N1-OSCP构建成功。