转录因子BUB1和BUB2调控拟南芥下胚轴伸长的研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:shujun2000
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我们通过激活标签法以BR受体弱突变体bri1-5为背景筛选到了一个遗传修饰子——ben2-1Dbri1-5。为了研究BEN2的功能,我们将ben2-1Dbri1-5与野生型回交得到了 ben2-1D单突变体,与野生型相比,ben2-1D单突变体表现出下胚轴伸长、叶柄伸长、莲座较大、开花推迟等表型。为了探究BEN2调控这些生长发育过程的分子机理,我们以WS2和ben2-1D为材料,提取RNA,进行了RNA-seq。数据分析显示,几个B-box转录因子的表达在ben2-1D中发生了显著变化。其中,BUB1(BEN2 up-regulated B-boxprotein1)和 BUB2在 ben2-1D 中分别上调2.9和2.5倍。首先,我们用35S启动子驱动BUB1BUB2在WS2野生型拟南芥中超表达,得到了35S::BUB1和35S::BUB2转基因植物。为了研究BUB1和BUB2的功能,观察了在和35S::BUB1和35S::BUB2转基因植物在不同培养条件下不同生长时期的表型,结果显示35S::BUB1和35S::BUB2幼苗与野生型相比在暗培养条件下没有明显的区别,而在白光、红光、远红光和蓝光下培养的35S::BUB1和35S::BUB2幼苗与野生型相比表现出下胚轴伸长的表型。扫描电镜观察显示35S::BUB1和35S::BUB2植物下胚轴的伸长主要是由于细胞伸长而非细胞数目增多造成的。与野生型相比,长日照条件下培养的35S::BUB1和35S::BUB2植物还表现出开花推迟的表型。我们从ABRC订购了BUB1和BUB2两个基因的T-DNA插入突变体的种子,并通过遗传杂交获得了bub1 bub2双突变体。对单突变体和双突变体进行了表型观察,结果显示其与野生型相比在不同的培养条件下及不同的生长时期并没有明显的差异,说明BUB1和BUB2在促进下胚轴伸长和推迟开花方面可能和其它的同源基因的功能是冗余的。近年来的研究显示PIF4在调控拟南芥下胚轴伸长中发挥重要的功能。为了研究BUB1和BUB2促进下胚轴伸长是否与PIF4相关,我们检测了BUB1和BUB2在PIF超表达材料及PIF缺失突变体中的表达,结果显示BUB1在PIF4、PIF5超表达材料中上调表达,而在pif4、pif5缺失突变体中下调表达。序列分析显示,BUB1和BUB2的启动中含有PIF转录因子直接结合的DNA元件,说明BUB1和BUB2可能在PIF下游,作为PIF的靶基因参与调控拟南芥下胚轴的伸长。
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