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目的探讨mi RNA对酒精代谢酶的调控作用,并揭示miRNA在酒精代谢过程中的调控作用机制。方法利用TCGA数据库寻找在人肝细胞中表达的ADH和ALDH基因,利用miRTar.human数据库筛选可靶向上述基因的候选miRNA,依据miRNA和靶基因在肝脏中的表达数据计算两者的表达相关性,最后利用RNAhybird软件计算miRNA和靶向位点的结合自由能。通过荧光RNA迁移率变动实验技术和双荧光素酶报告基因实验验证miRNA与靶点的结合,利用细胞转染miRNA mimics进行荧光定量PCR实验和Western blotting实验,观察miRNA对内源性靶基因和靶蛋白的调控作用。最后,利用乙醇刺激细胞,观察乙醇刺激细胞后,miRNA对细胞内靶基因和蛋白水平的影响。结果通过生物信息学分析,我们最终确定了11个miRNA可能参与调控人肝细胞中ADH和ALDH基因表达。鉴于hsa-miR-1301-3p在肝脏中与ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1的表达均显著负相关(r分别为–0.469、–0.459和–0.480),最终选择hsa-miR-1301-3p和三个酒精代谢基因ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1作为“模型分子”来验证我们预测结果的准确性。荧光RNA迁移率变动实验技术和双荧光素酶报告基因实验证明hsa-miR-1301-3p可以分别与ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1基因的3’UTR相互结合。荧光定量PCR和Western blotting实验表明,在HepG2和Huh7细胞系中,外源性hsa-miR-1301-3p显著抑制了内源性ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1 mRNA和靶蛋白的表达水平,另外,hsa-miR-1301-3p也可抑制酒精对ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1的诱导表达。结论hsa-miR-1301-3p可通过结合ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1基因3’UTR区域下调这些基因的表达,进而影响酒精的代谢进程。