【摘 要】
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研究目的为了进一步研究长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)与肿瘤发生之间的关系,前期通过RLM-RACE技术的联合高通量测序作为一种试验方法,应用于HepG2细胞转录组全长的检测,结合生物信息学方法对高通量测序数据进行分析,筛选出LncRNA100436,并对其生物功能和分子机制进行初步研究。材料与方法通过芯片测序的到一条新发现的lncRNA,结合已有的数据库和网
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研究目的为了进一步研究长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)与肿瘤发生之间的关系,前期通过RLM-RACE技术的联合高通量测序作为一种试验方法,应用于HepG2细胞转录组全长的检测,结合生物信息学方法对高通量测序数据进行分析,筛选出LncRNA100436,并对其生物功能和分子机制进行初步研究。材料与方法通过芯片测序的到一条新发现的lncRNA,结合已有的数据库和网站对了LncRNA100436进行生物信息学分析。使用荧光原位杂交(FISH)进行LncRNA100436的细胞内定位。构建lncRNA100436过表达细胞系,通过CCK8细胞平板克隆和细胞周期检测检测细胞增殖。及通过流式检测细胞凋亡,通过Western Blot技术检测与增殖和凋亡相关的蛋白和相关通路蛋白的表达量。最后利用TCGA数据库分析LncRNA100436表达量对肝癌患者的生存时间的影响。结果LncRNA100436全长1501bp,位于5号染色5p15.2区域,与恒河猴之间有高度保守性,二级结构复杂无蛋白编码能力。LncRNA100436表达主要位于肝癌细胞HepG2的细胞质内。LncRNA100436过表达降低肝癌细胞增殖活性以及细胞克隆形成能力,细胞周期结果显示,G1期细胞比率增加9.2%,S期细胞比率下降3.2%,p27和p21蛋白表达水平升高,CyclinD1,CyclinE1和CDK6蛋白表达水平下降。提示LncRNA100436可抑制肝癌细胞增殖。此外,细胞凋亡比率增加3.8%,Bcl-2表达量降低,Bax表达量升高,促进细胞凋亡。这些结果表明LncRNA100436抑制PI3K/AKT信号通路来抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。LncRNA100436的表达与肝癌患者的生存时间相关。结论LncRNA100436通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制HepG2细胞增殖、促进细胞凋亡,并且肝癌患者LncRNA100436表达水平与其寿命密切相关。
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