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背景:本课题组关于腺病毒携带肝细胞生长因子(adenovirus-hepatocyte growth factor,Ad-HGF)治疗缺血性心脏病的II期临床试验结果显示:单次给予慢性缺血性心力衰竭患者Ad-HGF治疗并不能持续缓解患者心衰情况。因此,本研究的目的是评估重复转染Ad-HGF治疗大鼠心肌梗死后心衰的可行性和有效性。方法:本课题研究分2部分第一部分:筛选在大鼠心梗后心衰模型中重复注射Ad-HGF的有效方法采用开胸结扎前降支的方法构建大鼠心梗模型,4周后行小动物心脏彩超评估心衰模型成功建立情况,后即通过梗死周边区分2-3点局部心肌注射和经腹心包腔注射的方式给予腺病毒携带绿色荧光蛋白(adenovirus-green fluorescence protein Ad-GFP)5×107PFU/只,每7天处死1只大鼠,取心脏标本冰冻切片后激光共聚焦显微镜观察荧光表达情况。8周后再次通过局部心肌注射和经腹心包腔注射的方式给予Ad-GFP5×107PFU/只,每7天处死1只大鼠,取心脏标本冰冻切片后激光共聚焦显微镜观察荧光表达情况。第二部分:与单次注射Ad-HGF比较观察重复注射Ad-HGF对大鼠心梗后心衰心功能的改善作用在结扎前降支后4周,行心脏核磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)评价左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)<40%,入选成功构建大鼠心梗后心衰模型。32只大鼠分为四组:空腺病毒载体组、生理盐水组、Ad-HGF单次注射组及Ad-HGF重复注射组,每组8只大鼠。空腺病毒组于结扎后4周及8周时分两次经腹心包腔给予空腺病毒载体(null-Ad)100μl;生理盐水组于结扎后4周及8周分两次经腹心包腔给予生理盐水100μl;Ad-HGF单次注射组于结扎后4周时经腹心包腔给予Ad-HGF 1×109PFU100μl,8周时给予生理盐水100μl;Ad-HGF重复注射组于结扎后4周时经腹心包腔给予Ad-HGF 5 ×108PFU/ml 1000μl,8周时再次给予Ad-HGF 5 × 108PFU/ml 100μl;各组分别在结扎后8周、12周行心脏核磁共振检查评价心功能指标。结扎后12周处死实验动物,取心脏标本行蛋白免疫印迹观察HGF蛋白的表达,免疫组化检测血管新生的情况。结果:反复开胸直接心肌注射对大鼠创伤较大,没有大鼠能在第三次开胸后存活,故淘汰此重复注射方法;经腹心包腔重复注射Ad-GFP显示了较好的效果,大鼠耐受性较好,并且在第二次重复注射后,GFP表达维持了 14天,提示重复注射可行;在总Ad-HGF治疗剂量相同的条件下,结扎12周后,分次重复注射组较单次注射组心功能改善更佳,新生血管更多(P<0.05)。同时,HGF的蛋白表达得到了延长。结论:在大鼠心梗后心衰模型中分次重复注射Ad-HGF能延长HGF基因在体内的表达时程,显示出比单次注射更好的治疗效果。但是否能推演到临床应用中,还需要大型哺乳动物实验的印证。