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第一节子宫内膜容受性相关分子在体外培养的子宫内膜上皮细胞的表达 目的:通过对子宫腺肌病不孕患者和健康妇女子宫内膜上皮细胞的原代培养和传代培养,获取足够的内膜上皮细胞供后续实验研究,并检测子宫内膜容受性分子αvβ3,LIF,HOXA10在子宫腺肌病不孕患者和健康妇女在位子宫内膜上皮细胞的表达,探讨子宫腺肌病不孕的发生机制。 方法:分别选取子宫腺肌病不孕患者(实验组)和健康妇女(对照组)分泌中期在位子宫内膜上皮细胞培养,应用胶原酶消化法提取原代在位子宫内膜上皮细胞并用角蛋白进行免疫细胞化学鉴定, western blot检测各组在位子宫内膜上皮细胞αvβ3,LIF,HOXA10的表达。 结果:从在位子宫内膜组织中成功获取原代子宫内膜上皮细胞并进行传代培养。应用角蛋白抗体对细胞进行免疫细胞化学染色鉴定,证实培养的细胞为子宫内膜上皮细胞。经Western Blot方法检测发现实验组和对照组子宫内膜上皮细胞都有αvβ3,HOXA10,LIF蛋白表达。而在对照组子宫内膜细胞的表达明显高于实验组患者子宫内膜,差异有显著性(P<0.01)。 结论:应用胶原酶消化法能成功获得子宫内膜上皮细胞并能进行传代培养,从而提供足够的细胞来源供进一步研究。子宫腺肌病不孕患者在位内膜上皮细胞的子宫内膜容受性相关因子αvβ3, HOXA10, LIF较正常内膜上皮细胞有着更低的表达。 第二节低强度超声对体外培养的子宫腺肌病不孕患者在位内膜上皮细胞粘附的作用 目的:探讨不同超声强度的低强度脉冲超声对体外培养的子宫腺肌病不孕患者在位子宫内膜上皮细胞的影响。 方法:选取第二部分第一节实验中获取的 P1代子宫腺肌病不孕患者子宫内膜上皮细胞培养后,用不同超声强度(15、30、60 mW/cm2)的脉冲超声刺激7天(每天20分钟)。用细胞粘附实验检测作用后细胞的粘附率,ELISA技术检测最适作用强度作用于子宫腺肌病不孕患者在位子宫内膜上皮细胞的ICAM-1的表达差异。 结果:对细胞予以不同强度(15、30、60 mW/cm2)的 LIPUS连续刺激7天后(每天刺激20分钟),细胞粘附能力增加,30、60mW/cm2增高达2倍以上,与15 mW/cm2刺激组相比,差异有统计学意义,但30,60 mW/cm2组间差异不明显。而15 mW/cm2仅有轻微的增高。随着作用时间的延长,细胞黏附能力增加。从第3天开始,差异明显。第4天后粘附率升高趋于平缓。在位子宫内膜上皮细胞予以30MW/CM2 LIPUS刺激7天后,收集各组上清,结果提示上清中的ICAM-1浓度较对照组升高,以第3~7天明显,有显著性差异(P<0.05),第4天后浓度升高趋于平缓。 结论:低强度脉冲超声能促进子宫腺肌病不孕患者在位子宫内膜上皮细胞的粘附力增加,促进细胞间粘附分子的合成,从而增进子宫内膜的容受性。 第三节低强度超声对子宫腺肌病不孕患者在位内膜上皮细胞子宫内膜容受性相关分子的作用 目的:探讨低强度脉冲超声对子宫腺肌病不孕患者在位子宫内膜上皮细胞子宫内膜容受性相关分子的影响。 方法:取第二部分第一节实验中获取的 P1代子宫腺肌病不孕患者在位子宫内膜上皮细胞培养后予以30 mW/cm2的脉冲超声作用7天(每天20分钟)。分别用western blot, RT-PCR技术检测细胞中αvβ3,LIF,HOXA10的蛋白水平及mRNA的表达差异。 结果:30mW/cm2的LIPUS作用于细胞后,细胞αvβ3,LIF, HOXA10的蛋白表达水平分别都增高达2.03倍,1.95倍,2.06倍。差异有统计学意义(P<0.01)。 RT-PCR结果显示:αvβ3,LIF,HOXA10 mRNA表达均增高分别达2.03倍,2.12倍,2倍。差异有统计学意义(P<0.01)。 结论:低强度脉冲超声能促进子宫腺肌病不孕患者在位子宫内膜上皮细胞αvβ3,LIF,HOXA10的表达,从而增加子宫内膜容受性。