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目的 钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ（CaM-PKⅡ）是Ca2+-CaM激活的介导细胞内蛋白磷酸化的一种重要的蛋白激酶，属丝氨酸—苏氨酸蛋白激酶家族，广泛存在于多种组织中，参与细胞内多种生理功能的调节过程，在细胞内的信息传递过程中起着非常重要的作用。本研究旨在探讨CaM-PKⅡ在豚鼠耳蜗基底膜中的分布情况及其在老年性聋、爆震性聋动物模型耳蜗基底膜的活性变化情况，阐明CaM-PKⅡ在内耳低位听觉径路上的形态学分布以及在老年性聋和爆震性聋发病过程中的变化及其与耳蜗功能的关系，为预防和治疗老年性聋及爆震性聋提供新的理论依据和方法。 方法 本研究以正常豚鼠、老年性聋小鼠、爆震性聋豚鼠作为研究对象，以畸变产物耳声发射（DPOAEs）评价耳蜗毛细胞功能，采用免疫组织化学方法、32P-ATP掺入法以及扫描电子显微镜技术，分别观察：正常豚鼠 第口军医大学硕士学位论文 一 CaMPK 11在耳蜗基底膜的分布及其活性；老年性聋小鼠耳蜗功能的动态变 化以及 CaMPK 11活性变化规律；爆震性聋豚鼠耳蜗功能的动态变化以及 CaM．PK 11活性变化规律。 结果 1．正常豚鼠耳蜗C。ti器经免疫组化染色后耳蜗硬铺片法观察，发现 各回内、外毛细胞内 CaM－PK 11呈中等强度免疫阳性反应，外毛细胞（OHC） 着色较内毛细胞（IH）稍强，阳性物质弥漫分布于胞浆，胞核无明显着 色。各口之间染色程度无明显差异。 2．正常豚鼠耳蜗基底膜 CaM－PK 11的总活性为（3．255土 0刀36） pmol·min－’·mg”‘，其中以 Ca‘”／CaM依赖活性为主，占 94．74％，CaZ”／CaM 非依赖活性为（0．171士0刀ZI）pmol·min－’·mg”，占总活性的5二6％。 3．C57和 BALB／。近交系小鼠畸变产物耳声发射（DPOAES）检测结 果显示，随年龄增高两近交系均出现由高频向低频发展的听力减退。C57 小鼠 60日龄在频率 4．0，6．0，8．0 kHZ处与 20日龄相比 DPOAES幅值降低 非常显著（4刀 kHZ：－3＊ 土2．37 ZS 3刀8土1．78 dB SPL；6刀 kHZ：．0．33士2．19 vs 4．75士3刀2 dB SPL；8刀 kHz：－2刀8士2．15 vs 3．42士2刀2 dB SPL，均 p＜0刀1），各频率DPOAES幅值随日龄增加呈现进行性下降并逐渐向较低 频率方向发展，到180日龄在频率＞二刀 kHZ处与20日龄相比均出现显著 降低（p＜0．05）。BALB＊小鼠60日龄在频率4＊，6．0，8＊ kHZ处与20 日龄相比 DPOAES幅值亦呈现非常显著的降低（均 p＜0刀1），随日龄增加 进行性加重，并逐渐向较低频率方向发展，表现出与C57小鼠相似的规律， 但其听力损失较C57小鼠更严重。 4·C57和BALB儿近交系小鼠扫描电镜观察可见：20日龄耳蜗基底膜 OHC纤毛排列整齐，呈鸟翼状，IHC纤毛排列基本整齐，90日龄可见OHC 纤毛张角的方向发生改变，ISO日龄除可见到 OHC纤毛张角的方向发生 改变外，尚可见到 OHC数量的增多，可单独出现，也可表现为局部 4排 －3－ 第四军匠大学项士学位论文 一 OHC，未见毛细胞的缺失。C57和BALB儿近交系小鼠扫描电镜无明显差 异。 5．C57和 BALB儿近交系小鼠在 20日龄时 CaM－PK 11总活性分别为 （3．150士0．029）pmol·min＊·mg”’和 ＊．149土0＊24)pmol·min”‘·mg习， 与20日龄相比，在90日龄时分别降低2．32％和5．97％（均尸＜0．05），在 120、150和180日龄时分别降低7．65％、17．40％、20．00％（C57小鼠） 和15．50％、n＊6％、34卫6％（8＊＊趴c小鼠）（均＊＜0刀1）：ZO日龄时 CaZ”／CaM＊依赖活性分别为 0．166土 0．022)pmol·min＊·mg－’和（0。164 上0＊26）pmol·minJ·mg’，与20日龄相比，均在90日龄时（P＜0＊5） 和150、180日龄时（均P＜0刀1）显著降低。C57和BALB止近交系小鼠不 同日龄Cay／CaM非依赖活性占总活性的百分比基本不变。 6．豚鼠爆震后即刻出现听阈的提高，与爆震前相比，DPOAEs幅值于 IkHz处开始出现非常显著的减低 门．33土1．42 vs 16．50士1．69 dB SPL， p＜0＊1)，在skHZ 处两者的差值更大（－12．83士2．15VS28．sfl石odBSPL， P＜0刀1），DPOAES幅值随频率升高而逐渐下降，以高频段更为严重。爆 震后20天DPOAES幅值在0．5、0．7、IkHZ处基本恢复至爆震前水平，在 1．5～8 kHZ处较爆震后即刻明显提高，但仍低于