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1目的甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是最常见的甲状腺癌病理类型,约占甲状腺癌的80%-85%,见于任何年龄,发病主要受环境、遗传等因素的影响,是一种恶性程度较低的甲状腺癌。但是近年来,甲状腺乳头状癌的发病率逐年升高,转移和复发是预后不良的主要因素,也是致死的主要原因。环状RNA(circular RNA,circ RNA)是一类广泛存在于真核生物的非编码RNA,主要通过micro RNA“海绵”的方式调控下游靶蛋白的表达,从而参与包括细胞生长、发育、凋亡、迁移等的多种机体生命过程。研究证实,ci RS-7(circular RNA-7,CDR1as)参与胃癌、结肠癌等恶性肿瘤的发生发展过程。ci RS-7含有mi R-7(micro RNA-7)的结合位点,可以通过调控mi R-7参与细胞的病理生理过程。但是ci RS-7与甲状腺乳头状癌的关系还不明确,PTC中ci RS-7是否可以通过结合mi R-7发挥作用也不清楚。本研究利用q RT-PCR检测ci RS-7在甲状腺乳头状癌中的表达情况,并分析ci RS-7与临床病理因素之间的关系。然后通过质粒转染的方法上调和下调ci RS-7的表达,分析ci RS-7对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的影响。同时,探究ci RS-7对mi R-7以及mi R-7的下游靶基因EGFR的调控作用。为甲状腺乳头状癌的靶向治疗提供有力的实验证据。2方法2.1探究ci RS-7在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义随机选取17例甲状腺乳头状癌组织及其对应癌旁正常组织,利用q RT-PCR检测ci RS-7在PTC组织及癌旁组织中的表达差异,同时分析ci RS-7表达量和患者临床病理因素的相关关系。2.2探究ci RS-7对甲状腺乳头状癌细胞生物学功能的影响通过质粒转染分别上调和下调ci RS-7的表达,通过CCK-8和集落形成实验检测转染前后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。2.3 Ci RS-7影响甲状腺乳头状癌生物学功能的机制研究2.3.1 ci RS-7和mi R-7在调控细胞增殖、迁移和侵袭方面的关系PCR技术检测转染ci RS-7下调质粒后mi R-7的表达变化。利用ci RS-7下调质粒重新转染mi R-7表达抑制的PTC细胞,研究ci RS-7和mi R-7在增殖、迁移和侵袭中可能发挥的作用。2.3.2 mi R-7和EGFR之间的靶向关系生物信息学分析mi R-7和EGFR之间的碱基互补配对关系,荧光素酶报告基因系统检验mi R-7和EGFR的直接结合关系。2.3.3 Ci RS-7和EGFR在调控细胞增殖、迁移和侵袭方面的关系Western blot检测ci RS-7下调对EGFR蛋白表达的影响。利用ci RS-7下调质粒重新转染EGFR过表达的PTC细胞,研究ci RS-7和EGFR在增殖、迁移和侵袭中可能关系。2.4统计学处理SPSS 21.0统计软件分析数据,两样本的比较采用四格表的卡方检验,两样本定量资料采用t检验,P<0.05代表差异有统计学意义。3结果3.1 ci RS-7在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义相较于癌旁正常甲状腺组织和正常细胞系,ci RS-7在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中显著高表达(P<0.01)。以ci RS-7表达量的中位值(1.9)为界,将患者分为高表达组和低表达组,发现ci RS-7表达量和肿瘤组织大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)情况密切相关。3.2 ci RS-7对甲状腺乳头状癌细胞生物学的影响通过质粒转染上调和下调ci RS-7表达后,CCK8和集落形成实验检测结果显示,下调ci RS-7表达抑制PTC细胞的增殖和集落形成能力,上调ci RS-7表达促进其增殖和集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示下调ci RS-7表达促进细胞凋亡,上调ci RS-7抑制细胞凋亡;划痕实验和transwell迁移实验结果显示下调ci RS-7抑制细胞迁移,上调促进细胞迁移;transwell侵袭实验显示下调ci RS-7抑制细胞侵袭,上调ci RS-7促进细胞侵袭,差异均有统计学意义(P<0.01)。3.3 Ci RS-7影响甲状腺乳头状癌发生发展的机制研究3.3.1 ci RS-7通过mi R-7调控细胞增殖、迁移和侵袭q RT-PCR检测显示PTC细胞中ci RS-7被下调后,mi R-7的表达升高;下调ci RS-7重新使得mi R-7下调的细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低。3.3.2 mi R-7通过直接结合EGFR调控细胞增殖、迁移和侵袭生物信息学网站查询发现,mi R-7和EGFR的3’-UTR之间存在碱基互补配对关系,荧光素酶报告基因系统结果验证mi R-7可能直接调控EGFR蛋白的表达。3.3.4 ci RS-7通过EGFR调控细胞增殖、迁移和侵袭Western blot实验结果显示,PTC细胞中ci RS-7下调后,EGFR蛋白表达下降。下调ci RS-7重新使得EGFR过表达的细胞的增殖、迁移和侵袭能力重新降低。4结论1 ci RS-7在甲状腺乳头状癌的发生发展过程中可能发挥重要作用。2 mi R-7介导了ci RS-7在PTC细胞中的增殖、迁移和侵袭;EGFR可能是mi R-7的直接作用靶点。3 ci RS-7可能通过调控mi R-7/EGFR从而在甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭中发挥作用。