土地盐碱化是最重要的环境问题之一。大豆作为一种重要的粮食和经济作物,具有中度的盐度耐受性。为了提高大豆的耐盐性,第一个关键步骤是发现和鉴定耐盐相关基因。以前的研究表明,过表达NAC转录因子基因GmSIN2可以提高大豆的耐盐性。为了进一步研究其在大豆盐胁迫响应中的作用机制,利用大豆酵母双杂交cDNA文库,筛选出两个与GmSIN2互作的蛋白GmRAB7(Ras-relatedproein Rab-7A)和 GmPRLl(Pleiotropic regulatory locus 1)。同时,证明了 GmRAB7与GmSIN2间的蛋白互作关系及GmRAB7在耐盐性中的功能。本论文实验结果如下:首先,利用大豆酵母双杂交库,获得了 37个可能与GmSIN2相互作用的功能蛋白。对其中5个候选的互作蛋白进行了互作关系验证,筛选出了可能与GmSIN2互作的蛋白GmRAB7和GmPRL1。经BiFC(双分子荧光互补)和Pull-down实验验证,表明GmSIN2在体外分别与GmRAB7和GmPRL1蛋白质相互作用。其次,我们将每个蛋白质分成几个不同的片段。我们发现含有NAC亚结构域的GmSIN2片段可以与包含RAB亚结构域的GmRAB7片段相互作用。亦我们发现GmRAB7也可以与含有NAC结构域的其他蛋白质相互作用,如GmNTL1,GmSIN1和GmNTL7。因此,GmRAB7可能与多个NAC转录因子相互作用来调节植物的盐胁迫响应。进一步分析了 GmPRL1和GmSIN2蛋白互作关系,BiFC(双分子荧光互补)实验结果显示二者可以在细胞核中相互作用。酵母双杂交结果表明,GmSIN2的NAC亚结构域与GmPRL1的含WD重复的亚结构域具有强烈的相互作用关系。同时,发现GmPRL1和GmSIN2蛋白均位于细胞核内。在上述研究基础上,分析了 GmRAB7在耐盐中的功能:亚细胞定位实验发现GmRAB7定位于细胞质中。在盐处理下,GmRAB7过表达拟南芥主根长度显著长于对照。同时发现GmRAB7在拟南芥中的同源基因是AtRAB7基因。其功能丧失突变体Atrab7根在盐处理下比对照短,该结果间接表明GmRAB7基因在盐胁迫耐受性中起重要作用。