论文部分内容阅读
香蕉是一种典型的呼吸跃变性果实,对其进行成熟的调控及机理的研究具有重要的理论和实践意义。MADS-box基因是一个序列特异的基因家族,所编码的产物为转录因子,越来越多的资料表明,其在花的发育、果实的发育和成熟过程中起着重要的作用。本实验室通过构建香蕉果实的SSH文库,已经获得了MADS-box基因的片段,而且通过芯片的分析表明其可能与果实的成熟相关,因此对其进行进一步的研究是非常必要的。 根据已知SSH片段设计引物,采用PCR的方法从香蕉果实cDNA文库中筛选出一条命名为MuMADS1长为888bp的片段和另一条命名为MuMADS2长为553bp的片段,进行Blastx比对后发现两者都与其他物种的MADS-box基因的同源性很高,进行保守结构域的分析发现,MuMADS1含有一个非常保守的MADS-box结构域和一个较保守的K-box结构域,经Genscan分析后发现,MuMADS1含有一个完整的阅读框,共编码235个氨基酸。Southern杂交表明,MuMADS1在香蕉基因组中的拷贝数较低。为了研究MuMADS1的表达,首先测定了香蕉果实乙烯和CO2的变化,结果显示两者都在采后的第15天开始发生跃变,在采后第25天,都同时达到高峰,根据其变化趋势,选取了0天、采后4天、8天、12天、18天、20天和25天的果实作为表达分析的材料,同时也将香蕉的根、茎叶和花作为表达分析的材料,然后提取各自的RNA并反转录成cDNA作为表达分析的模板。RT-PCR的结果表明其仅在香蕉的果实和花中有表达,而在根和茎叶中没有表达。为了更加准确地分析其在果实不同成熟度及花中的表达水平,以不同材料的cDNA作为模板以SYBR Green为染料进行实时荧光定量PCR,结果表明其在香蕉采后各成熟度的果实中的表达是有差异的,其变化趋势是先下降后上升。在采后的第0天-第8天内,其表达量一直下降,从采后的第8天-第20天内,除了第12天-18天有一小幅度的下降外,一直上升,在采后的第20天达到高峰。其发生跃变以及达到高峰的时间都要比乙烯提前,而其在花中的表达量较高。根据其表达量的变化,推测MuMADS1可能除了花的发育起作用外,在果实发育的早期与果实的发育相关,而在果实发育的晚期与成熟相关。 首次在香蕉中克隆MADS-box基因并进行表达分析对于MADS-box基因与乙烯的生成、果实成熟机理间的关系以及有着一定的理论指导意义,值得进一步的研究,