3-NPA对缺血预处理后脑组织caspase-3表达的影响

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:kingsun555
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背景:脑缺血预处理与3-NPA预处理均可对随后发生的严重缺血产生明显增强的耐受性,这一现象在近年来的研究中已得到证实,它们的发生机制目前仍不十分清楚,可能涉及凋亡相关基因的表达。但是关于脑缺血预处理后应用3-NPA干预是否对再次脑缺血起到脑保护作用的研究尚未见报道。目的:研究脑缺血预处理后3-NPA干预对再次脑缺血的神经功能、脑梗死体积以及脑组织中caspase-3表达的影响,探讨脑缺血预处理后3-NPA干预引起的脑保护机制,为临床缺血性脑血管病的防治提供理论依据。方法: 72只健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(体重200~250g)随机分成3组:脑缺血组(n=24)、脑缺血预处理组(简称预处理组,n=24)、脑缺血预处理后3-NPA干预组(简称干预组,n=24)。各组按再缺血时间6h、1d、2d、4d分为4个亚组。脑缺血组:直接从颈总动脉进线栓至右侧大脑前动脉,阻滞大脑中动脉血流。预处理组:按改良的Koizumi线栓法制成局灶-局灶脑缺血模型。大鼠麻醉后暴露右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,结扎颈外动脉远端,并离断颈外动脉远端,在颈外动脉近心侧残端剪一小口,经此小口插入备好的线栓(直径0.205mm高弹力碳素鱼线,插线头蘸蜡成圆头,临用时蘸取肝素),经颈内动脉入颅至大脑前动脉,阻滞大脑中动脉血流,缺血30分钟后,拔出线栓,结扎颈外动脉残端,缝合皮肤。半小时内腹腔注射生理盐水(20ml.kg-1)。24小时后在右侧颈总动脉剪一小口,经颈内动脉再栓至右侧大脑前动脉造成永久缺血。干预组:手术方法同上,但在预处理术后半小时内腹腔注射20mg.kg-1浓度为1mg/ml的3-NPA。分别观察三组动物的以下指标:按Bederson法进行神经功能评价;用2%氯化三苯四唑啉(TTC)染色测量梗死体积;行苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理形态,免疫组织化学方法观察caspase-3的表达。结果:1、神经功能缺损评分:在缺血后相同时间点,预处理组比缺血组神经功能缺损评分明显减轻(P<0.05),干预组神经功能缺损评分较预处理组及缺血组均明显减轻(P<0.05),均具有统计学意义。2、脑梗死体积测定:在缺血后相同时间点,预处理组比缺血组梗死体积明显减小(P<0.05),干预组梗死体积较预处理组及缺血组均明显减小(P<0.05),均具有统计学意义。3、免疫组化结果:在缺血后相同时间点,预处理组海马区Caspase-3阳性细胞表达较缺血组明显降低(P<0.05),干预组较缺血组及预处理组均明显降低(P<0.05)。干预组在缺血后6h已经出现Caspase-3阳性细胞表达,并逐渐上升,在1d-2d达到高峰后逐渐下降,组内各时间点相比具有显著差异(P<0.05)。结论:1、缺血预处理组对再次缺血可产生保护作用,减轻神经功能缺损症状,缩小梗死体积,减少caspase-3的表达,增强脑组织对脑缺血的耐受能力。2、干预组与缺血组和预处理组比较对再次缺血产生的脑损伤有更好的保护作用,caspase-3的表达进一步减少,提示3-NPA可进一步加强缺血预处理的神经保护作用。3、Caspase-3在相同时间点不同组间的表达有显著差异,提示抑制凋亡的发生可能是缺血预处理诱导脑缺血耐受的机制之一。
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