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目的 该研究对半边旗多糖进行了提取分离与组成分析;重点观察半边旗多糖对体外培养的人癌细胞株的抑瘤作用及对荷瘤小鼠的抑瘤作用的影响,探讨其抗肿瘤机制;同时该研究还对半边旗多糖的毒性进行了观察,测定LD<,50>,并对肝、肾等重要器官功能进行了观察,为深入了解半边旗多糖的药理学和毒理学作用提供实验数据.方法 1半边旗多糖的提取:用热水浸提法提取半边旗多糖.用硫酸-苯酚法、硫酸蒽酮等方法对半边旗多糖进行含量检测,以得率为考察指标,通过正交实验进行提取工艺研究.2半边旗多糖的组分分析与鉴定:用紫外分光光度法、红外光谱、薄层色谱和气相色谱分别对半边旗多糖的纯度、分子构型、单糖组成进行分析与鉴定.3半边旗多糖对体外培养的人癌细胞的抗癌作用观察:采用体外培养人肺腺癌细胞SPCA-1、人白血病细胞HL60,人鼻咽癌细胞CNE-2Z分别测试5个浓度的半边旗多糖对细胞的影响,用MTT法检测对三个瘤株的抑瘤率,计算IC50.4半边旗多糖对荷瘤小鼠模型的抗癌作用观察:分别建立荷S180、肝癌、淋巴肉瘤、艾氏腹水癌的荷瘤小鼠模型,分别以不同浓度的半边旗多糖腹腔注射给药,同时设5-FU阳性对照组,联合用药组、生理盐水对照组,连续给药10天,以荷瘤小鼠生存时间、瘤重为指标,观察半边旗多糖对荷瘤小鼠生命延长率、抑瘤率的影响,同时观察用药过程中半边旗多糖对重要器官重量的影响.5半边旗多糖抗癌作用机制的研究:通过用流式细胞术、细胞形态学和琼脂糖电泳观察半边旗多糖对SPCA-1细胞的诱导凋亡作用;通过TRAP-ELISA法测定端粒酶活性,观察半边旗多糖对SPCA-1细胞端粒酶活性的影响通过RT-PCR法检测端粒酶亚单位mRNA的表达,观察半边旗多糖对端粒酶亚单位mRNA的影响.6半边旗多糖对荷瘤小鼠抗氧化功能的影响:用比色法检测荷瘤小鼠血清中SOD、CAT、GST、MDA、NO、总-SH等含量.观察半边旗多糖对荷瘤小鼠抗氧化功能的影响7半边旗多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响:流式细胞术分析CD<,3><+>、CD<,4><+>、CD<,8><+>、CD<,19><+>、NK分子表达并计算CD<,4><+>/CD<,8><+>.观察半边旗多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响.8半边旗多糖对荷瘤小鼠的毒性研究:急性毒性实验测定半边旗多糖的LD50,并观察荷瘤鼠用药10天后,重要器官指数,肝、肾功能变化.观察半边旗多糖对荷瘤小鼠的毒性.结论 1从厥类植物半边旗中成功分离得到体内外均有较好抗肿瘤作用的多糖.提取工艺稳定可靠,质量可控.2体外抗肿瘤机制可能与下调端粒酶亚单位hTERTmRNA表达,降低端粒酶活性,改变细胞周期时相分布,诱导肿瘤细胞凋亡有关.3半边旗多糖体内抗肿瘤机制可能主要与抗氧化损伤、增强机体免疫功能有关.4半边旗多糖急性毒性低,对肝、肾功能无明显影响,用药期间未见小鼠异常表现.5半边旗多糖与5-FU有协同抗肿瘤作用,可以减轻5-FU的副作用.6半边旗多糖得率高,纯度高,抗癌活性好,与崔燎报道半边旗水溶液抗肿瘤作用相当,提示其可能是半边旗主要的水溶性抗肿瘤活性成分.7荷瘤小鼠血清中巯基下降与抑瘤率成正比,且非常接近,提示血清中巯基含量的检测可以作为体内筛选抗肿瘤药物的手段和作为一种肿瘤标志物进行检测,对肿瘤的诊断、预后提供帮助.