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[目的] 自然杀伤细胞(NK细胞)和自然杀伤T细胞(NKT细胞)作为固有免疫的重要组成部分，在慢性乙型肝炎（CHB）的发生发展过程中起到重要作用。NK、NKT细胞的功能受到一系列活化性和抑制性受体的调节，这些受体对细胞功能的调节作用仍需进一步阐释。既往研究证实灵猫方对CHB具有良好的临床疗效，但具体的作用靶点仍未完全明确。本研究以NK、NKT细胞在CHB中的受体表达和功能特征为出发点，探讨灵猫方通过调节NK、NKT细胞功能治疗CHB的新的作用靶点，为中医药的现代化提供新的理论支持。 [方法] 收集HBV感染免疫激活期（IA期）、免疫耐受期（IT期）患者及正常对照者(HC组)，流式细胞术检测NK、NKT细胞的NKG2A、NKG2D、PD-1的表达以及IFN-γ和TNF-α的表达水平，NKG2A和PD-1对NK、NKT细胞因子分泌功能的影响，ELISA法检测各组人群外周血IL-10、TGF-β1水平。进一步收集经恩替卡韦抗病毒治疗2年且肝功能正常、HBV-DNA(-)但HBeAg(+)的CHB患者100例，随机分为中药治疗组和对照组两组，中药治疗组使用恩替卡韦联合灵猫方治疗，对照组使用恩替卡韦联合安慰剂治疗，流式细胞术检测两组患者治疗前、治疗后六个月及十二个月NK、NKT细胞的NKG2A、NKG2D、PD-1的表达以及经刺激后IFN-γ和TNF-α的表达水平。在以上研究的基础上，进一步收集HBeAg(-)CHB患者60名，随机分为中药治疗组和对照组两组，治疗组使用恩替卡韦联合灵猫方治疗，对照组使用恩替卡韦联合安慰剂治疗。CHB患者均检测HBV-DNA、ALT和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），逆转录PCR检测CHB患者与正常对照者PBMC PD-1 mRNA水平，流式细胞术检测各组人群PD-1的表达、AKT、ERK1/2、NF-κ B p65磷酸化以及经刺激后IFN-γ和TNF-α的表达水平，α-galcer体外刺激NKT细胞扩增观察NKT细胞的扩增效率，免疫荧光法检测肝脏组织石蜡切片CD3+细胞PD-1表达，并使用灵猫方中药醇提物体外实验研究灵猫方对NKT细胞的调节作用。 [结果] 外周血NK、NKT细胞比例上，IA组患者较HC组明显降低，并且IA组和IT组的CD56bright亚群NK细胞比例较HC组升高，CD56dim亚群比例降低，且与ALT水平有相关性。受体表达上，NKG2A+NK、NKT细胞比例IA组和IT组明显升高，PD-1+NKT细胞比例IA组和IT组明显升高，阻断PD-1后NKT细胞IFN-γ的表达上调;功能上，IFN-γ+NK、NKT细胞比例IA组和IT组明显较HC组降低;三组血清IL-10和TGF-β1水平无显著性差异。在灵猫方对血清HBeAg下降的研究中，对照组和中药治疗组入组治疗后十二个月HBeAg水平均有明显下降，但中药治疗组下降幅度更大。治疗后NK细胞比例两组较治疗前差异不具有显著性;NKT细胞比例两组均有上升，但中药治疗组上升更为显著。NKG2A+NK细胞比例两组治疗后均有显著下降，NKG2A+NKT细胞比例中药治疗组治疗十二个月较治疗前有显著下降。PD-1+NKT细胞比例中药治疗组治疗十二个月较治疗前有显著下降。IFN-γ+NK和IFN-γ+NKT细胞比例中药治疗组治疗十二个月较治疗前有显著升高。第三部分临床疗效上，对照组和中药治疗组治疗六个月时，HBsAg水平中药治疗组治疗后HBsAg水平有明显下降。NKT细胞比例中药治疗组和对照组治疗前后均有显著差异，但中药治疗组NKT细胞比例升高更快。PD-1+NKT细胞比例对照组治疗十二个月对比治疗前显著下降;中药治疗组治疗六个月和十二个月对比治疗前显著下降。IFN-γ+NKT细胞比例中药治疗组治疗六个月和十二个月较治疗前均有显著升高。HBeAg(-)CHB患者PBMC的PD-1 mRNA含量显著高于HC组，肝脏内CD3+细胞表达PD-1水平较高。CHB组NKT扩增效率较HC组明显低，NKT扩增率和PD-1表达水平具有显著的负相关性。pERK1/2+NKT细胞比例中药治疗组治疗六个月和十二个月较治疗前均有显著升高。使用anti-PD-1阻断剂后，NKT细胞ERK1/2分子的磷酸化水平有较明显升高，IFN-γ的分泌明显增高并可以部分被U0126所阻断。灵猫方醇提物体外实验表明灵猫方可以降低NKT细胞PD-1的表达，提高AKT、ERK1/2、NF-κB分子磷酸化水平，提高IFN-γ的表达。 [结论] CHB中NK、NKT细胞存在表型、功能的改变，不利于机体对HBV的清除。灵猫方联合恩替卡韦治疗可部分纠正NK、NKT细胞受体表达紊乱和功能抑制。进一步研究发现，PD-1分子在NKT细胞中高表达对NKT细胞的功能产生抑制作用，其机制包括促进凋亡、抑制扩增、降低信号通路分子的磷酸化水平并抑制IFN-γ的分泌。灵猫方联合恩替卡韦可通过降低NKT细胞PD-1的表达调节其IFN-γ的分泌功能，提高临床疗效。