翘嘴鲌(Culter alburnus)是中国名贵的鲤科(Cyprinidae)淡水鱼类,具有很高的经济价值。兴凯湖翘嘴鲌体银白色,肉质细嫩,其优良的肉质性状受到广泛关注。但由于过度捕捞,导致其天然资源日益减少,市场需求日趋紧张。因此,翘嘴鲌的人工养殖前景较好。鱼肉受消费者欢迎主要由于其营养丰富,肉质及风味良好。当前,国内外对体肌中肌苷酸(Inosine-5’-Monophosphate,IMP)水平的研究较多,从分子水平展开对鱼类肉质相关基因的研究也越来越多,越来越多的鱼类风味候选基因被逐步发掘出来,但不同储藏温度下IMP含量变化规律、不同生长时期IMP含量差异以及与IMP生成代谢密切相关的腺苷一磷酸脱氨酶(Adenosine5’-monophosphate deaminase,AMPD1)基因的研究还很少。本研究运用高效液相色谱技术测定翘嘴鲌2龄、3龄、4龄养殖群体及4龄野生群体,在(20±1)℃、4℃、-20℃贮存条件下肌肉组织中肌苷酸(IMP)含量及其变化规律。根据Genbank中已知的鲤科鱼类AMPD1基因序列设计引物,采用PCR技术和RACE技术首先克隆出翘嘴鲌腺苷一磷酸脱氨酶(AMPD1)的部分c DNA序列,再利用获得的序列设计引物扩增出包含3’UTR和5’UTR的其他部分的cDNA序列,将所得序列进行拼接,得到全序列;采用荧光定量PCR技术(Real-time PCR)检测AMPD1基因在兴凯湖翘嘴鲌肌肉组织中的表达量。试验结果如下:(1)2龄未经贮存(0h)肌肉组织IMP含量为3.4297mg/g,2龄和3龄群体IMP含量显著高于4龄IMP含量(p<0.05)。在3个贮存条件下,肌肉组织IMP含量在温度较高条件下降解速度更快,而冷冻保存肌肉组织测得结果显示IMP含量均较高,且降解缓慢。不考虑年龄和温度变化的影响,IMP含量与肌肉组织的贮存时间也有关系:IMP含量达到峰值后,贮存时间与IMP含量呈负相关。建议保存温度为低温冷冻,且7d内食用最佳。(2)获得了翘嘴鲌AMPD1基因c DNA序列全长2592bp,Genbank登录号为KP735961。其中包括完全的CDS区序列长度为2154bp,完整的3’UTR区片段大小为351bp,5’UTR区片段大小为87bp。预测编码717个氨基酸和一个终止密码子。(3)通过Blast比对显示翘嘴鲌AMPD1基因核苷酸序列CDS区与斑马鱼(Danio rerio)的同源性高达89%;而其氨基酸同源性比对结果显示与欧洲川鲽(Platichthys flesus)同源性为84%;与斑马鱼(Danio rerio)氨基酸同源性较高为93%,且编码的氨基酸数目与斑马鱼相同,均编码717个氨基酸。比对兴凯湖翘嘴鲌AMPD1基因的核苷酸序列和氨基酸序列均显示,其与鲤科鱼类的同源性更高。(4)对兴凯湖翘嘴鲌2龄、3龄、4龄养殖群体和4龄野生群体肌肉组织进行AMPD1基因表达分析。Real-time PCR结果表明,2龄翘嘴鲌AMPD1基因mRNA表达量最高,3龄表达量次之,显著高于野生和养殖群体4龄肌肉组织表达量(p<0.05);4龄野生群体肌肉组织表达量显著高于4龄养殖群体肌肉组织表达量(p<0.05)。AMPD1基因表达量随年龄递减。AMPD1表达量与IMP含量呈正相关。