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为了选育出适合发酵来生产酒精的酵母菌株,本论文以酒精酵母Saccharomyces cerevisiae YY为材料,利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(HIRFL)产生的100MeV/u碳离子束对酒精酵母进行了辐照诱变。采用红四氮唑(TTC)作为筛选指示剂,初筛得到了5株产酒能力有所提高的突变酵母菌。通过甜高粱汁发酵,测定发酵液中酒精含量和残糖,复筛出产酒精能力比出发菌株有明显提高的诱变菌株T4。并对其发酵条件进行了优化,以期获得的结果能够为甜高粱汁工业化生产酒精提供参考数据。
通过本论文的研究,得到以下初步结果:
1.在甜高粱汁培养基中,酒精酵母YY的对数生长期在8—20h之间,此时菌体的生长繁殖比较旺盛,活力最佳,为辐照诱变的最佳时期。辐照后,菌体的存活率随辐照剂量的增加呈现出逐渐衰减的趋势。
2.红四氮唑TTC是一种无色显色指示剂,活菌中所含的脱氢酶可将它还原成红色,因此可以根据菌落呈色的深浅判断酵母菌产酒精能力的高低,从而挑选出产酒能力较高的菌株。本试验用TTC双层培养基法初步筛选出了利用甜高粱汁发酵生产酒精能力较强的T4酵母菌株。
3.对影响T4菌发酵甜高粱汁生产酒精的几个主要因素(甜高粱汁糖度、接种量、温度、pH、无机盐)进行了初步探讨研究,得出了T4菌发酵甜高粱汁生产酒精的最适条件为:甜高粱汁糖度22%,接种量10%,温度30℃,pH4.5,无机盐加入量为:(NH4)2SO41g/L,KH2PO45g/L,MgSO43g/L。
4.对发酵条件进行优化后的中试结果显示:出发菌株YY发酵甜高粱汁的时间为36h,酒精产量为8.6%(VN),而T4突变菌甜高粱汁发酵液中的最终酒精含量可以达到9.8%,发酵时间仅为24h。因此,T4菌在工业应用中很有前景。