果树常用杀菌剂氟硅唑对斑马鱼的影响

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果树常用杀菌剂氟硅唑属于三唑类内吸性杀菌剂,主要可用于防治子囊菌纲,担子菌纲和半知菌类真菌,常用在防治苹果黑星菌、白粉病菌、梨黑星病等,其在土壤中半衰期为12 土 2天,由于土壤淋溶等作用,存在进入水体风险。目前缺乏氟硅唑对水生生物毒性报道,国外仅有氟硅唑对斑马鱼胚胎急性毒性评价。本文利用斑马鱼模型,研究氟硅唑对其毒性作用机理,为氟硅唑合理使用供理论依据。本论文主要进行氟硅唑对斑马鱼胚胎毒性,发现其引起斑马鱼胚胎心包囊肿,并造成凝血现象,利用苏丹黑B染色研究氟硅唑对斑马鱼胚胎心脏影响;利用吖啶橙染色、TUNEL染色、结合RT-qPCR技术,研究氟硅唑原药对斑马鱼胚胎发育毒性及对斑马鱼整体胚胎和24 hpf胚胎细胞凋亡影响;采用DAPI染色和单细胞凝胶电泳(singlecellgeleletrophoresis,SCGE)技术研究其对斑马鱼胚胎细胞DNA损伤的影响。氟硅唑对斑马鱼成鱼的毒性,在急性毒性试验中发现斑马鱼产生背部凝血,体节弯曲现象,通过亚致死浓度下的慢性毒性试验,研究其斑马鱼成鱼重要解毒器官肝脏的影响,利用细胞DAPI染色其研究DNA损伤情况。从胚胎和成鱼初步解析其对斑马鱼产生发育毒性作用。试验结果表明.:1氟硅唑原药对斑马鱼胚胎急性毒性168 h-LC50为4.95(3.32-14.29)mg.L-1属中毒。高浓度处理组诱导斑马鱼胚胎自主运动能力降低、内心率降低、孵化率降低、心包囊肿、尾部畸形,呈显著的剂量效应关系;2用吖啶橙染色与TUNEL染色两种方法确定氟硅唑诱导斑马鱼胚胎24 h细胞凋亡的主要部位为心脏、尾部脊髓区域,氟硅唑诱导斑马鱼胚胎96 h、168 h细胞凋亡的主要部位为心脏、尾部脊髓区域及颈部,其凋亡的能力随氟硅唑浓度增大而增大。3用彗星试验与DAPI染色微核两种方法检测氟硅唑对24 hpf斑马鱼胚胎细胞DNA损伤,结果表明,随着氟硅唑浓度增加,微核率显著(p<0.01)增加、彗星尾部DNA含量显著(p<0.01)增加、尾距显著(p<0.01)增加,表明氟硅唑诱导斑马鱼胚胎DNA损伤,呈显著的剂量-效应关系;4利用苏丹黑B染色检测氟硅唑对斑马鱼48、72h胚胎细胞造血细胞影响,结果表明,随着氟硅唑浓度增加,斑马鱼胚胎尾部造血细胞逐渐减少;5通过用RT-qPCR技术研究氟硅唑对斑马鱼胚胎凋亡相关基因的影响。结果表明,氟硅唑可能通过线粒体凋亡通路与死亡介导通路诱导斑马鱼胚胎细胞凋亡,具体结果需要进一步研究;6通过氟硅唑对斑马鱼成鱼急性毒性试验,发现随着氟硅唑浓度增加,斑马鱼成鱼死亡率增加,脊椎出血现象增加,并造成了不可逆的尾部弯曲;7通过氟硅唑对斑马鱼成鱼慢性毒性试验,氟硅唑可随着浓度增大对斑马鱼抵抗能力产生破坏,经过一定时间,斑马鱼可以自行修复氟硅唑对其一定损伤。
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