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目的: 广谱的转移抑制基因CD82/KAI1，属于四跨膜蛋白家族的重要成员之一，研究表明CD82棕榈酰化修饰对CD82在细胞膜上表达及定位于四跨膜蛋白的微域发挥其活性具有重要作用。然而，CD82棕榈酰化修饰对维持CD82功能的作用尚未完全阐明。通过对近质膜与CD82功能密切相关的三个不同棕榈酰化位点突变，观察CD82棕榈酰化修饰对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖转移相关的信号转导通路的影响及体外增殖迁移能力的影响。 方法: 首先，构建棕榈酰化突变体慢病毒，构建不同棕榈酰化位点突变的CD82突变体（包括Cys5，Cys74，Cys83单位点突变，和Cys5/Cys74、Cys5/Cys83、Cys74/Cys83、Cys5/Cys74/Cys83不同组合的多位突变的突变体），以单独的慢病毒载体作为阴性对照即blank组，过表达CD82作为CD82-WT组，不同棕榈酰化位点突变体分别标记为CD82-C5、CD82-C74、CD82-C83、CD82-C5.C74、CD82-C5.C83、CD82-C83.C74、CD82-C5.C74.C83。其次，采用qPCR和Western Blot方法分别检测乳腺癌细胞中CD82的表达。然后，通过细胞生长试验(CCK8)、Transwell小室方法和划痕方法来检测CD82棕榈酰化突变对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响，最后，采用Western Blot方法检测CD82棕榈酰化突变的对生长因子受体的活性以及肿瘤增殖转移有关的信号通路活性的影响。 结果: 1.通过测序方法检测构建的不同棕榈酰化位点突变的CD82突变体，结果显示CD82不同棕榈酰化位点突变体全部测序正确，说明CD82棕榈酰化突变体构建成功。 2.通过Western Blot和Q-PCR方法检测CD82在乳腺癌细胞中的表达情况。结果表明:CD82棕榈酰化突变体转染细胞后，CD82棕榈酰化突变体的表达相对于野生型CD82无显著性差异。 3.采用划痕方法和Transwell方法检测CD82棕榈酰化突变对乳腺癌细胞运动迁移能力的作用。结果表明:CD82的Cys83棕榈酰化突变或Cys5和Cys74棕榈酰化同时突变能够促进MDA-MB-231细胞迁移。 4.CCK8检测CD82棕榈酰化突变对乳腺癌细胞生长的影响。结果表明:CD82棕榈酰化的半胱氨酸残基5、74、83位点突变对能够促进乳腺癌细胞的增殖。 5.采用Western Blot检测CD82棕榈酰化突变对乳腺癌细胞中表皮生长因子受体(EGFR)和肝细胞生长因子受体(HGFR)的影响。结果表明:CD82的Cys83棕榈酰化突变能够激活表皮生长因子受体酪氨酸1173磷酸化;CD82的Cys83棕榈酰化突变及Cys5和Cys74棕榈酰化同时突变能够激活表皮生长因子受体酪氨酸845磷酸化。CD82的Cys5、Cys74、Cys83棕榈酰化突变以及Cys5和Cys74棕榈酰化同时突变能够激活肝细胞生长因子受体酪氨酸1313磷酸化;CD82的Cys5和Cys74棕榈酰化同时突变能够激活肝细胞生长因子受体酪氨酸1365磷酸化。 6.采用Western Blot检测方法研究CD82棕榈酰化突变对乳腺癌细胞中与肿瘤细胞的增殖和迁移相关的细胞内主要的信号转导通路活性的影响。结果表明:CD82的Cys83棕榈酰化突变以及Cys5和Cys74棕榈酰化同时突变能够激活PI3K/Akt信号通路;CD82的Cys5、Cys74、Cys83棕榈酰化突变能够激活MAPK信号通路;CD82棕榈酰化突变不影响PLCγ信号通路的活性。 结论: 不同的棕榈酰化位点突变对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖转移影响不同。 1.CD82的Cys83棕榈酰化突变及Cys5和Cys74棕榈酰化同时突变能够分别激活表皮生长因子受体酪氨酸1173磷酸化和845磷酸化，进一步分别激活PI3K/Akt信号通路中的Akt苏氨酸308和Akt丝氨酸473的磷酸化，从而促进MDA-MB-231细胞迁移。 2.CD82的Cys5、Cys74、Cys83棕榈酰化突变及Cys5和Cys74棕榈酰化同时突变能够分别激活肝细胞生长因子受体酪氨酸1313磷酸化和/或1365磷酸化，进一步激活MAPK信号通路中的磷酸化，从而促进MDA-MB-231细胞增殖。 3.CD82棕榈酰化突变不影响PLCγ信号通路的活性。