美洲大蠊腺苷提取物促进伤口愈合的作用及机制

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[目的]观察美洲大蠊腺苷提取物对创面愈合的促进作用,并探索美洲大蠊腺苷提取物对促进皮损修复的作用机制。[方法]选取SPF级SD大鼠30只,创建全层皮损创伤模型,分别给予美洲大蠊腺苷提取物(12.5mg/ml),生理盐水,重组表皮生长因子(10000IU/ml)处理。术后开始,隔天记录创面变化情况。分别取第4、6、8、10、12天伤口及其周围5mm皮肤固定后切片,采用苏木精-伊红染色,Masson三色染色,观察新生肉芽组织厚度、胶原沉积情况以及上皮重建化的程度。采用组织化学染色的方法,检测不同时间段新生皮肤巨噬细胞、TGF-β1特异性抗原表达情况。采用免疫荧光标记CD31分子,观察新生血管情况。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测不同浓度美洲大蠊腺苷提取物处理后对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)细胞活力的影响。采用蛋白质印迹法检测检测不同浓度美洲大蠊腺苷提取物处理后,小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)Smad2/3蛋白表达的变化情况。采用划痕法检测不同浓度美洲大蠊腺苷提取物处理后人皮肤成纤维细胞(HSF)、人永生化表皮细胞(HaCaT)的迁移情况。[结果](1)与生理盐水组相比,美洲大蠊腺苷提取物处理后能加速上皮重建的过程,增加新生血管的形成,而且不增加胶原纤维的沉积;与重组表皮生长因子组比较,伤口愈合速度无明显差异。(2)MTT结果显示,美洲大蠊腺苷提取物以浓度依赖的方式增加RAW264.7、HUVEC细胞的活力。(3)划痕实验说明,经美洲大蠊腺苷提取物处理后能增加HaCaT,HSF细胞的迁移活性。(4)Western Blotting结果显示,美洲大蠊腺苷提取物处理后能增加Smad2/3的磷酸化。[结论]美洲大蠊腺苷提取物能加速皮损后上皮重建化的速度,加快皮损的修复;初步证实了美洲大蠊腺苷提取物在促进皮损修复的过程中与“巨噬细胞-TGF-β1-Smad”这条与创伤修复的关键线索有关。
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