人3、7型腺病毒单克隆抗体制备及应用研究

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【目的】在先前的研究中,本课题组将人7型腺病毒的中和表位嵌入3型腺病毒载体衣壳,构建出人3、7型嵌合腺病毒rAdMHE3。本论文旨在用rAdMHE3作为抗原免疫小鼠,并采用杂交瘤技术制备出针对人7型腺病毒的具有中和活性的单克隆抗体(中和单抗),探讨采用衣壳嵌合策略构建的重组腺病毒用作免疫原,制备针对嵌入的中和表位的中和单抗的可行性;制备出人3型腺病毒的中和单抗,并用这些单抗对人3型腺病毒的中和表位进行鉴定;制备出针对人3型腺病毒的一系列单抗,并从中筛选出腺病毒直接免疫荧光法检测用的单抗,为建立腺病毒的直接免疫荧光检测方法奠定基础。【方法】用HEp-2细胞或AD293细胞扩增rAdMHE3,后者用氯化铯梯度离心纯化后免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备出针对rAdMHE3的单抗。用体外腺病毒中和实验筛选出中和单抗,蛋白免疫印迹实验(Western blot)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和抗体结合竞争ELISA对中和单抗进行鉴定。用直接免疫荧光实验筛选出腺病毒直接免疫荧光法检测用的单抗。【结果】共获得22株针对rAdMHE3的单抗,从中经体外腺病毒中和实验筛选出3株特异中和人3型腺病毒的单抗、4株特异中和人7型腺病毒的单抗。经进一步鉴定,4株人7型腺病毒中和单抗均识别7型腺病毒的六邻体高变区5内的血清型特异性中和表位,并且该表位被证明是构象表位;3株人3型腺病毒中和单抗识别的表位均为线性表位,且该表位位于3型腺病毒的六邻体高变区4。经直接免疫荧光实验,筛选出4株单抗可特异识别人7型腺病毒,2株单抗可特异识别人3型腺病毒,10株单抗可识别人3、4和7型腺病毒。【结论】本论文初步证明了,中和表位衣壳嵌合策略构建的重组腺病毒用于制备针对嵌入的中和表位的中和单抗是可行的;人7型腺病毒的六邻体高变区5内的血清型特异性中和表位为构象表位;人3型腺病毒的六邻体高变区4内可能含有线性的血清型特异性中和表位。
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