【摘 要】
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目的:探讨不同剂量敌草快（Diquat,DQ）中毒对小鼠脾脏HMGB1/NF-κB p65炎症信号通路及M1/M2巨噬细胞平衡的影响。方法:随机将64只健康、成年、雄性ICR小鼠分为4组,每组16只:空白对照组（control,n=16）、12mg/kg DQ染毒组（12mg/kg DQ,n=16）、24mg/kg DQ染毒组（24mg/kg DQ,n=16）、48mg/kg DQ染毒组（48mg
【基金项目】
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遵义市科技局科技计划项目（遵市科合HZ字（2020）211号）； 贵州省科技计划项目（黔科合基础-ZK[2022]一般655）；
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目的:探讨不同剂量敌草快（Diquat,DQ）中毒对小鼠脾脏HMGB1/NF-κB p65炎症信号通路及M1/M2巨噬细胞平衡的影响。方法:随机将64只健康、成年、雄性ICR小鼠分为4组,每组16只:空白对照组（control,n=16）、12mg/kg DQ染毒组（12mg/kg DQ,n=16）、24mg/kg DQ染毒组（24mg/kg DQ,n=16）、48mg/kg DQ染毒组（48mg/kg DQ,n=16）,每组再随机分为2个亚组,分别为观察组和24小时取材组。control组予等渗生理盐水按48mg/kg/只一次性腹腔注射建模,DQ染毒组分别予1.9mg/ml DQ按12mg/kg/只、24mg/kg/只及48mg/kg/只一次性腹腔注射建模。观察组建模成功后每6小时观察小鼠行为学变化并计算存活率,观察期14天。取材组建模成功24小时后取脾脏,称重记录,计算脾脏指数,留取部分脾脏作HE染色并行脾脏病理评分,部分脾脏制片后用于透射电子显微镜观察脾脏的超微结构特征,部分脾脏用免疫组化检测HMGB1、NF-κB p65、TNF-α、IL-6和IL-10的表达,部分脾脏用蛋白质印迹法检测HMGB1、NF-κB p65蛋白含量,部分脾脏作脾单细胞悬液用于流式细胞术检测M1、M2巨噬细胞亚群。结果:（1）各组小鼠14天行为学表现:14天观察期内control组无中毒表现,DQ染毒组染毒后出现精神萎靡,上睑下垂,活动减少,爬行无力,口鼻黏膜发绀,呼吸急促,进食减少,体重减轻,对外界刺激反应减慢等症状,其中12mg/kg DQ组及24mg/kg DQ组染毒24小时后上述症状减轻,活动增加,而48mg/kg DQ组染毒后上述症状逐渐加重直至死亡。（2）各组小鼠14天存活率:control组、12mg/kg DQ组及24mg/kg DQ组14天生存时间为14±0天,累积生存率均为100%。48mg/kg DQ组14天生存时间为4.625±0.42天,累积生存率为0%,n=8,（P＜0.05）。（3）脾脏指数:与control组相比,DQ染毒组脾脏指数随中毒剂量的增大而减少,且24mg/kg DQ组及48mg/kg DQ组的脾脏指数明显小于control组（P＜0.05）。（4）脾脏病理评分:control组脾脏组织HE染色无中毒的病理学表现,与control组比,DQ染毒组出现病理学表现,且随中毒剂量的增大而加重,其中24mg/kg DQ组及48mg/kg DQ组病理学表现明显,脾脏病理评分明显增加（P＜0.05）。（5）脾脏组织透射电镜:与control组比,脾脏淋巴细胞固缩及凋亡趋势随DQ中毒剂量的增加而明显,脾脏巨噬细胞的吞噬现象也随DQ中毒剂量的增加而明显,且48mg/kg DQ组脾脏巨噬细胞内可见吞噬的淋巴细胞及碎片。（6）各指标免疫组化结果:与control组相比,12mg/kg DQ组、24mg/kg DQ组及48mg/kg DQ组HMGB1、NF-κB p65、TNF-α及IL-6的表达随中毒剂量的增大而增多（P＜0.05）,而IL-10的表达随中毒剂量的增大而减少（P＜0.05）。（7）HMGB1及NF-κB p65蛋白质印迹法检测结果:与control组相比,12mg/kg DQ组、24mg/kg DQ组及48mg/kg DQ组HMGB1、NF-κB p65的蛋白含量随中毒剂量的增大而增多（P＜0.05）。（8）脾脏M1、M2巨噬细胞亚群:与control组比,12mg/kg DQ组、24mg/kg DQ组及48mg/kg DQ组的M1及M2巨噬细胞亚群占比随中毒剂量的增加而明显下降（P＜0.05）。结论:DQ中毒后降低脾脏M1、M2巨噬细胞亚群占比,降低免疫应答能力,可能与DQ激活HMGB1/NF-κB p65炎症信号通路有关。
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