DNA损伤检验点蛋白表达对肿瘤辐射敏感性的影响

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本文应用X射线和12C6+离子对不同肿瘤细胞:HL-60、K562、SMMC-7721和HepG2进行辐照,用克隆形成率和四唑盐比色法(MTT)测定四种细胞的辐射敏感性;通过流式细胞术测定细胞周期分布、细胞凋亡、ATM和SMC1蛋白的表达变化。应用免疫细胞化学法与流式检测相结合研究了γ-H2AX蛋白表达的时间效应与剂量效应之间的关系。   实验结果表明,四种细胞的辐射敏感性由强到弱依次为HL-60>K562>SMMC-7721>HepG2。即ATM表达量越低的细胞对辐射越敏感,周期阻滞水平越低,细胞凋亡越明显,但辐照后ATM蛋白的表达无显著增加,说明ATM的表达量和功能状态与细胞辐射敏感性有关,但其表达水平不能完全反映ATM蛋白激酶的活性。对ATM表达量差异最显著的HepG2和HL-60细胞来说,辐照前SMC1的表达水平与细胞S期的含量没有直接关系,辐照后SMC1蛋白的上调表达在S期阻滞修复中发挥明显的作用。辐照后1h,HL-60和HepG2细胞的H2AX磷酸化水平随吸收剂量的增加呈线性正相关,但曲线斜率与细胞辐射抗性的差异没有直接的联系。γ-H2AX的消失率与存活分数存在良好的相关性,HepG2细胞抗辐射能力强,这一时间短,HL-60细胞抗辐射能力弱,这一时间长。可以用γ-H2AX的消失速率来评估细胞的辐射敏感性。以SMMC-7721细胞为同步化细胞模型发现,与其它同步化方法相比,步进电机旋转同步化培养法对细胞损伤最小,同步化效率最高,达到M期>90%,G0/G1期>80%,S期>60%,G2/M>50%。同种射线辐照,G0/G1期SMMC-7721细胞的存活相对G2/M期来说较高。12C6+离子辐照明显减小了二者敏感度的差异性。
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