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研究背景脂肪间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)来源于脂肪基质成分,可通过分泌因子和进一步分化等方式来保护、调节和修复机体。人体内脂肪组织含量丰富,所含的MSCs也更多,加之获取时操作创伤性更小,具有良好的应用前景。目前,自体干细胞移植深受人们关注。由于自体来源ADMSCs无免疫原性,对肝病患者术后恢复也极为有利。然而,临床上大多数肝病患者都存在或轻或重的肝硬化,肝硬化是否会对自体ADMSCs的生物学特性产生影响仍未可知,目前也缺乏相关的研究。研究目的明确肝硬化人群来源的ADMSCs在生物学特性上及功能上是否发生改变,探讨肝硬化对干细胞特性的影响,为肝病患者自体ADMSCs的临床应用提供一定的参考。研究内容及方法选取10名肝硬化患者及10名无肝硬化患者,术中获得腹腔内脂肪组织。经I型胶原酶消化获得细胞进行实验。具体研究内容包括:1.提取与鉴定:I型胶原酶消化法获得细胞,选取P3代细胞进行CD44、CD90、CD105、CD45四种标记物检测鉴定。2.增殖检测:P4代细胞通过MTT法检测细胞增长速度。3.迁移检测:P4代细胞通过划痕法和Transwell法计数伤口治愈率和穿膜细胞数。4.脂肪细胞分化检测:P3代细胞在诱导液进行1-2周的诱导,染色鉴定。5.凋亡水平检测:P4代细胞通过Annexin V-FITC/PI法检测。6.对大鼠肝硬化作用:构建肝硬化大鼠模型,通过门脉注射ADMSCs,观察大鼠一般情况、肝功能、肝脏大体及病理改变。研究结果1.两组ADMSCs形态都比较均一,具有明显的纤维细胞形态,多平行排列,部分呈旋涡样;标志物CD44、CD90和CD105表达都搞,CD45表达低。2.MTT实验显示两组细胞均对数形式增长,组内和组间的吸光度差异在统计学上均无意义。3.迁移实验显示两组间伤口治愈率和穿膜细胞数均相近,差异在统计学上无差异。4.脂肪细胞诱导显示两组细胞在第7天就能观察到细胞内脂滴形成,2周后脂滴增大增多,几近占据细胞内整个空间。5.Annexin V-FITC/PI法检测凋亡结果显示两组细胞存活、凋亡及坏死三种状态的细胞所占比例相近。6.门脉注射ADMSCs能改善肝硬化大鼠肝功能、减轻肝脏异常病理改变。研究结论1.肝硬化对ADMSCs细胞形态和纯度无明显影响。2.肝硬化对ADMSCs体外增殖能力无明显影响。3.肝硬化对ADMSCs体外迁移能力无明显影响。4.肝硬化对ADMSCs体外成脂分化无明显影响。5.肝硬化组对ADMSCs体外细胞凋亡水平无明显影响。6.肝硬化患者来源ADMSCs在改善肝功能上与无肝硬化患者来源ADMSCs无明显差异。7.肝硬化患者来源ADMSCs在改善肝组织病理改变上与无肝硬化患者来源ADMSCs无明显差异。综上所述,在我们研究的范围内,肝硬化对ADMSCs无明显影响;肝硬化来源和无肝硬化来源的ADMSCs在改善大鼠肝硬化上也无明显差异,为提高自体ADMSCs治疗肝脏疾病提供了一定的参考价值。