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目的:研究幽门螺杆菌L型(helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染对胃癌侵袭、转移能力的影响,探讨Hp-L型在胃癌发展中的作用和可能机制。 方法:将胃癌BGC-823细胞与幽门螺杆菌L型按1:20、1:100、1:500的不同比例共培养24小时,进行以下实验。①应用具有聚碳酸酯和重建基底膜(基质胶, matrigel)的transwell小室细胞侵袭模型,观察与Hp-L型作用后胃癌BGC-823细胞的侵袭能力;②应用免疫组化(SP法)方法检测胃癌 BGC-823细胞埃兹蛋白(ezrin)、和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达情况;③应用westen-blotting实验测定胃癌BGC-823细胞ezrin和MMP2蛋白表达量的变化;④应用革兰染色及免疫组化(SP)法检测120例胃癌组织中的Hp-L型感染情况;⑤应用免疫组化(SP)法检测胃癌组织中的ezrin和MMP2的表达。比较胃癌组织Hp-L型感染阳性组和阴性组上述指标的表达结果;分析Hp-L型感染与ezrin、MMP2表达的关系以及和临床病理因素之间的关系,进一步探讨Hp-L型感染对胃癌侵袭、转移生物学行为的影响以及Hp-L型在胃癌发展中的作用。 结果:①Transwell侵袭实验发现随着胃癌BGC-823细胞与Hp-L型细菌的浓度比例增大,胃癌 BGC-823细胞穿透重建基底膜的数量逐渐增多,3次实验结果其穿膜细胞数分别为:37±4.9、45.3±5.9、56.6±5.6和61.3±4.5,经单因素方差分析,穿透重建基底膜的胃癌细胞数量在不同实验组之间的差异有统计学意义(F=24.78,P<0.01)。②细胞爬片免疫组化染色可见,随胃癌细胞与细菌比例增大,ezrin和MMP2阳性的胃癌BGC-823细胞数逐渐增加,在3次实验中,每张爬片的每1000个细胞中 ezrin阳性的细胞数分别为:283.67±42.5、454.5±51.7、651.5±54.4和814.5±44.3,经单因素方差分析,各组之间差异有统计学意义(F=136.2,P<0.01)。每张爬片的每1000个细胞中MMP2阳性细胞数分别为:282.7±47.4、444.8±48.8、596.3±31.7和795.3±36.4,经单因素方差分析,各组之间差异也有统计学意义(F=164.4,P<0.01)。③Westen-blotting实验发现,随着胃癌BGC-823细胞与Hp-L型比例增大,胃癌BGC-823细胞中ezrin和MMP2的表达量逐渐增加,呈细菌浓度依赖性。④120例胃癌组织中有88例革兰染色检出Hp-L型,其阳性率为73.3%(88/120);免疫组化Hp-L型抗原表达阳性率为70.8%(85/120),革兰染色Hp-L型检出和Hp-L型抗原表达同时阳性的病例有82例(两者同时阳性者为Hp-L型阳性),其阳性率为68.3%。革兰染色切片发现Hp-L型可散在分布于癌性腺腔、癌巢和间质中,亦可聚集于其中,并见到Hp-L型黏附于胃癌细胞表面或位于癌细胞胞质内的现象。Hp-L型形态多样,有圆形、短杆状、腊肠样等,但大多为原球体。⑤胃癌组织中Hp-L型阳性组的ezrin和MMP2表达阳性率分别为70.73%(58/82)和74.39%(61/82),均高于Hp-L型阴性组的ezrin和MMP2表达阳性率42.1%(16/38)、39.47%(15/38),均有统计学意义(均为 P<0.005)。经四格表资料χ2检验,胃癌组中 Hp-L型阳性与ezrin、MMP2的阳性表达呈正相关(r=0.27, r=0.34,均为P<0.001)。⑥胃癌中Hp-L型阳性与肿瘤的大小、癌细胞的血管侵袭、浸润深度及淋巴结转移具有相关性(P<0.001~P<0.05)。 结论: 1、Hp-L型感染可能会增强胃癌细胞的侵袭和转移能力。 2、Hp-L型感染可能增强胃癌细胞中ezrin和MMP2表达,进而促进胃癌的侵袭和转移,影响胃癌的发展。