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第一部分人瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养和秋水仙碱对其细胞增殖、周期的影响目的:培养原代人体瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid Fibroblast,KFB);并观察秋水仙碱作用细胞后,其增殖及细胞周期的变化。方法:采用常规的组织块贴壁培养法进行原代瘢痕疙瘩成纤维细胞培养;不同浓度秋水仙碱(1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml)处理细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察秋水仙碱作用后细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测秋水仙碱对细胞周期的影响。结果:原代瘢痕疙瘩成纤维细胞培养成功;秋水仙碱能抑制细胞的生长,对细胞分裂前期(G2期)产生影响,并呈时间依赖性和药物浓度依赖性。结论:组织块贴壁培养法可以得到瘢痕疙瘩成纤维细胞;秋水仙碱在一定浓度范围内可调控细胞的生长及细胞周期,可以抑制瘢痕疙瘩的形成。第二部分秋水仙碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞基质金属蛋白酶的影响目的:研究秋水仙碱对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞产生基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的影响。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,不同浓度秋水仙碱(2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml)处理细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测KFB的基质金属蛋白酶(MMP)mRNA的表达情况;采用Western Blot方法检测KFB的基质金属蛋白酶(MMP)蛋白的表达情况。结果:秋水仙碱组的MMP-1和MMP-2的mRNA和蛋白表达均高于对照组。MMP-1的mRNA表达水平分别为0.282±0.015、0.369±0.022、0.541±0.027、0.672±0.020,较对照组(0.174±0.016)上调(P<0.05);MMP-2 mRNA表达水平分别为0.371±0.026、0.548±0.031、0.653±0.019、0.796±0.024,较对照组(0.201±0.033)上调(P<0.05),并呈浓度依赖性。秋水仙碱组MMP-1蛋白表达水平分别为0.205±0.013、0.293±0.027、0.349±0.034、0.512±0.035,较对照组(0.127±0.031)上调(P<0.05);MMP-2蛋白表达水平分别为0.395±0.036、0.526±0025、0.673±0.014、0.792±0.037,较对照组(0.278±0.023)上调(P<0.05),并呈浓度依赖性。而秋水仙碱组未发现MMP-9 mRNA及蛋白表达。结论:秋水仙碱促进人瘢痕疙瘩成纤维细胞表达MMP-1和MMP-2,从而增加瘢痕组织中胶原蛋白的降解,可能参与抑制瘢痕疙瘩形成。