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沙门氏菌(Salmonella)是一种重要的人畜共患病病原,由其引起的感染居于食源性疾病第二位,该病原感染引起腹泻、恶心呕吐、高热、伤寒等症状。沙门氏菌严重危害人类健康,也给养殖业造成重大损失。本试验主要是比较两株大肠杆菌噬菌体对沙门氏菌的裂解效果,通过同源重组的方法获得重组噬菌体,并对重组噬菌体的宿主谱进行测定。噬菌体的尾丝蛋白决定特异性宿主,本试验通过设计简并引物,扩增实验室分离的编码噬菌体尾丝蛋白的基因序列,以此为基础对噬菌体的尾丝蛋白进行批量的改造,获得改变或是拓宽宿主谱的重组噬菌体。1、T4噬菌体尾丝蛋白的改造和重组噬菌体宿主谱测定本试验以两组沙门氏菌为宿主,一组为美国株,一组为实验室分离株,分别检测了大肠杆菌噬菌体WG01和QL01的宿主谱。并以宿主谱比较宽的噬菌体WG01的尾丝蛋白基因作为供体,改造宿主谱比较窄的噬菌体QL01。选取WG01噬菌体中编码尾丝蛋白的7个不同长度的基因序列利用基因重组技术替换QL01相同位置的基因序列。本试验共获得了5个重组成功的子代噬菌体,2株重组噬菌体因为未找到合适的宿主菌,因此未分离到。重组噬菌体WGce能裂解15株沙门氏菌临床分离株,其宿主谱比野生噬菌体WG01多6株,比QL01多9株,其中3株沙门氏菌是不能被野生噬菌体WG01和QL01裂解的。本研究为快速筛选或制备针对特异性病原菌的噬菌体提供一种借鉴方法。2、简并引物扩增烈性噬菌体尾丝蛋白基因改造噬菌体的尾丝蛋白,获得重组噬菌体,需要有大量噬菌体尾丝蛋白的基因序列。本试验的研究目的是利用噬菌体尾丝蛋白的N端和C端均有一段保守的氨基酸序列,并且尾丝蛋白N端的氨基酸序列更为保守,同时编码噬菌体WG01和噬菌体QL01尾丝蛋白的gene37基因的5’和3’端各有长度不等的相同的核苷酸序列,长度分别为190bp和540bp。采用CODEHOP软件设计简并引物,设计上游引物4条和下游引物8条,通过组合的方式得到32对引物。利用噬菌体gene37上的相同核苷酸序列,对BLAST结果进行分析,采用Oligo7软件设计了上游引物3条和下游引物3条,通过组合的方式得到9对引物。通过PCR对实验室分离到的31株噬菌体进行尾丝蛋白的扩增,实验结果显示,用CODEHOP设计的32对引物中可以扩增出9个基因序列,Oligo7软件设计的9对引物可扩增出5个基因序列,其中2个目的条带比较清晰,3个目的条带比较模糊。本试验的研究意义在于可以简化获取噬菌体尾丝蛋白基因的程序,降低时间成本,为进一步改造噬菌体的尾丝蛋白提供所需的基因序列。