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以菠萝(Ananascomosus(L.)Merr.)吸芽的叶基组织为起始材料,诱导出了愈伤组织,经过进一步培养,愈伤组织可以分化出不定芽。再以这些不定芽的叶片为材料,研究了不同2,4-D、BA组合对叶片脱分化以及体细胞胚发生的影响。发现当BA浓度介于1~2mg·L-1,配合3~5mg·L-1的2,4-D可以获得50%~70%愈伤组织诱导率,同时还有部分叶片基部直接分化出了体细胞胚,但频率低(10%~20%),分化出的体细胞胚数量也较少,每枚叶片只有1.35个体细胞胚。
通过比较在愈伤组织长期的继代过程中,非胚性愈伤组织的形态结构、分化能力和组织细胞学特征,把非胚性愈伤组织分为瘤状节状组织和薄壁组织团等类型,不同类型的愈伤组织可以通过拟原球茎、多芽体以及不定芽的形式进行器官发生。其中拟原球茎产生体细胞胚的能力最强,多芽体其次。
同时研究了2,4-D、NAA、BA、TDZ等在由菠萝愈伤组织诱导产生体细胞胚过程中综合影响。结果表明,2,4-D在体细胞胚诱导过程中起着极为重要的作用,其适宜浓度为5mg·L-1~9mg·L-1,适当浓度的BA(Omg·L-1~2mg·L-1)在降低畸形胚比例和增加体细胞胚发生率方面有重要作用,但BA的存在也会促进愈伤组织分化不定芽;用低浓度的TDZ(0.0l~O.1mg·L-1)与BA效果相似。在不同生长调节物质处理组合中,MS+1mg·L-1BA+8mg·L-12,4-D培养基中的体细胞胚发生率最高(98%),发生量达53个/g组织。NAA在低浓度(2~5mg·L-1)时,利于非胚性愈伤组织的增殖;而高浓度的NAA虽能促进体细胞胚发生,但这种体细胞胚很难继续增殖,在萌发时只生根不发芽。液体悬浮培养明显能提高体细胞胚增殖率,MS+2mg·L-1NAA+4mg·L-1BA能促进初代原胚组织增殖,达到约740个体细胞胚/g原胚组织。但培养时间过长会产生基部联合的次生胚,以及体细胞胚的休眠。椰乳能提高体细胞胚的萌发率,但容易导致茎过度伸长并出现明显的节间,缺少根的形成。含有2g·L-1活性炭或1mg·L-1GA3的MS固体培养基可以将30d转株率从13.4%提高到60·90%。