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蛔虫是鹦鹉体内常见的寄生线虫,对宿主的危害较为严重。感染鹦鹉的蛔虫主要是禽蛔虫,禽蛔虫寄生于鹦鹉等鹦形目鸟类的小肠内,种类较多,且分布广泛。鹦鹉感染蛔虫后,可引起精神沉郁、食欲不振、腹泻、消瘦和贫血等症状,严重感染时可导致死亡,给鹦鹉的养殖造成严重的经济损失。因此,对鹦鹉蛔虫进行准确鉴定,探索其遗传变异及系统进化关系,对鹦鹉蛔虫病的防控具有重要的意义。本研究对采自广州动物园金刚鹦鹉体内的6条蛔虫进行分子鉴定,同时对其线粒体基因细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(cox1)、细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ(cox2)、烟酰胺脱氢酶亚基Ⅰ(nad1)、烟酰胺脱氢酶亚基Ⅱ(nad2)、烟酰胺脱氢酶亚基Ⅳ(nad4)进行测序和序列分析,探讨鹦鹉源蛔虫的遗传变异情况。1.从鹦鹉中采集的蛔虫经形态学鉴定后,采用引物NC5/NC2对其核糖体DNA内转录间隔区(ITS)进行PCR扩增、克隆和测序,并应用DNAStar软件对所测序列与GenBank上公布的相关蛔虫ITS序列进行同源性比对和种系发育分析。结果显示,所有样品ITS片段长度均为1015 bp,与鸽蛔虫相关序列(KF147909)的相似性最高,达93.8%;与蛔目其他蛔虫的相似性均低于68.6%。基于ITS构建的种系发育树显示,鹦鹉蛔虫6个样品均位于同一分支,与鸽蛔虫的亲缘关系最近。结果表明,从鹦鹉中采集的蛔虫属于禽蛔属蛔虫(暂命名为鹦鹉蛔虫)。2.以6条鹦鹉蛔虫样品为研究对象,采用PCR技术分别扩增cox1、cox2、nad1、nad2和nad4部分基因并进行序列测定和遗传变异分析。结果显示,所扩增的鹦鹉蛔虫pcox1、pcox2、pnad1、pnad2和pnad4基因片段长度分别为441 bp、341 bp、512 bp、591 bp和430 bp,其A+T含量分别为64.38%~65.14%、58.82%~59.86%、65.96%~66.60%、70.99%~71.71%和63.96%~64.72%。鹦鹉蛔虫cox1、cox2、nad1、nad2和nad4基因分别有7、4、9、12和9个变异位点,种内变异分别为0.0%~1.6%、0.0%~1.0%、0.2%~1.7%、0.5%~1.6%和0.0%~1.8%,与蛔目其他蛔虫同源基因的种间差异分别为11.9%~18.6%、11.3%~19.0%、18.0%~31.4%、22.1%~46.7%和19.2%~45.9%。这5种基因分别有5、4、6、6和5个单倍型,其核苷酸多样性值分别为0.00746±0.00171、0.00461±0.00154、0.00837±0.00175、0.00793±0.00182和0.00914±0.00211,平均遗传距离分别为0.008、0.005、0.009、0.008和0.009。基于这5种基因采用MP、NJ和ML三种方法构建的系统发育树一致,鹦鹉蛔虫6个样品聚在一起,且与鹦鹉源蛔虫Ascaridia sp.同在一个分支,鹦鹉蛔虫与鸽蛔虫的亲缘关系最近。结果表明鹦鹉蛔虫pcox1、pcox2、pnad1、pnad2和pnad4基因序列种内相对保守,种间差异较大,可作为种间遗传变异研究的分子标记。综上所述,本研究应用分子生物学手段鉴定了來源于动物园的鹦鹉蛔虫,并基于5种线粒体基因(cox1、cox2、nad1、nad2、nad4)对鹦鹉蛔虫的种群变异情况进行了研究,为蛔虫的分子分类、群体遗传学以及蛔虫病的诊断和防治提供了有用的分子信息。