日本沼虾(Macrobrachium niponense),俗称青虾、河虾,隶属于甲壳纲,十足目,长臂虾科,沼虾属,是目前我国淡水养殖业中的主要经济虾类之一。近年来日本沼虾出现了个体小型化,性早熟等种质资源退化的现象,严重制约日本沼虾的养殖效益。性腺抑制激素(Gonad inhibiting hormone,GIH)作为甲壳动物生殖内分泌调控体系中的重要一员,与日本沼虾的性腺发育密切相关。性腺抑制激素(GIH)是甲壳动物高血糖激素家族(CHH家族)中的一种神经肽。除GIH外,该家族还包括高血糖激素(CHH)、蜕皮抑制激素(MIH)和大颚器抑制激素(MOIH)。日本沼虾存在两种类型性腺抑制激素(GIH-A和GIH-B)。本文利用基因工程的方法克隆了两种性腺抑制激素基因,并利用原核表达载体和大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)成功表达出了GIH-A和GIH-B的蛋白。利用镍柱与超滤管将蛋白浓缩复性后,获得纯度较高的两种蛋白,并利用其制备多克隆抗体。抗体效价检测结果表明,两种抗体效价均为1:64;Western blot结果显示,两种抗体特异性良好。在此基础上,利用免疫荧光法对两种性腺抑制激素进行免疫定位。结果表明,GIH-A和GIH-B分布于日本沼虾眼柄视上神经节X器官的两种类型细胞中。其分别分布于细胞类型I(Type I)细胞的细胞质中,分布于细胞类型II(Type II)细胞的细胞周围。此外,其不仅在日本沼虾眼柄中有分布,而且还分布于日本沼虾胸神经节中。GIH-A和GIH-B分布于胸神经节中类似于Type I细胞的细胞质中,type II细胞的细胞周围,此结果与其在视上神经节中分布结果一致。莠去津是一种内分泌干扰物,影响甲壳动物的内分泌系统正常功能的分泌。本文利用荧光定量PCR法检测了不同浓度的莠去津(0.001mg/L,0.01mg/L,0.1mg/L,1mg/L)对日本沼虾视上神经节中GIH-B表达量的影响。结果发现,当莠去津浓度为0.1mg/L对GIH-B的表达量影响极显著,有明显下降趋势。这表明莠去津浓度为0.1mg/L时,对日本沼虾视上神经节中GIH-B影响极大。研究成果不仅可以为研究性腺抑制激素的作用机制和功能分析奠定基础,为解决日本沼虾养殖过程中的性早熟问题提供参考,也可以为甲壳动物内分泌学研究提供基础资料。同时也为莠去津对甲壳动物内分泌系统的毒性研究提供新的资料。