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大小和结构不同的磷酸化合物在人体的能量、物质和信息传递等方面具有非常重要的功能。对不同磷酸化合物的检测与跟踪将有利于阐明它们的不同生理功能。荧光检测技术由于灵敏度高、选择性好等优点,成为识别检测各种磷酸化合物的重要技术手段。
利用Zn2+不猝灭荧光且对磷酸根具有良好结合能力的特点,构筑双核Zn2+配合物作为磷酸根的荧光探针,它不仅可以克服氢键识别易受水分子影响的缺点,而且可以通过调节双核之间的距离,协同识别不同大小的磷酸化合物。为克服目前该类探针多为紫外激发损害生命体正常生理活动的缺点,本论文利用可见光激发的4-氨基-7-磺酸胺基-1,2,3-苯并呋咱(ASBD)为荧光团(λex~460 nm),在它的4-氨基和7-磺酸胺基上分别通过乙基偶连Zn2+螯合团二(2-吡啶甲基)胺(DPA)构筑了探针配体L1,配体及其Zn2+的配合物激发波长约为460 nm,在可见光区,实现了减小对生命组织和细胞损害的目的。配体溶液中加入两倍Zn2+,荧光没有明显变化,该溶液对加入的多磷酸根如三磷酸根、焦磷酸根、ATP等具有明显的荧光增强效应;而对加入的单磷酸根及其余阴离子均没有引起相关的荧光响应。初步的研究表明,双核Zn2+与多磷酸根的协同配位增强了配体与Zn2+的配位,阻断了PET过程,导致荧光增强。
为进一步实现对三磷酸根和焦磷酸根的识别,我们利用同样可见光激发的4-氨基-1,8-萘酰亚胺作为荧光团来扩大两个Zn2+配位团的距离,通过引入类似于配体L1的Zn2+螯合基团,构筑了新的探针配体L4。在水中,向其中加入两倍的Zn2+,荧光增强2-3倍,继续向该溶液中加入各种磷酸根均引起荧光猝灭;而在甲醇中,L4/2Zn2+实现了对三磷酸根和焦磷酸的荧光识别,最后我们对相应识别的机理做了初步探讨。
我们还利用萘环作为荧光团,通过在萘环的2,7-位引入两个Zn2+螯合基团,进一步改变磷酸根识别过程双核Zn2+的位置,来探讨其对不同磷酸化合物的荧光识别性能的影响。