第一部分、可溶性B7-H3（sB7-H3）在支气管哮喘患儿血浆中的表达及临床意义　　目的：研究支气管哮喘患儿外周血中可溶性B7-H3（sB7-H3）的表达水平，并分析其与其他细胞因子的相关性，探讨sB7-H3在支气管哮喘中的异常表达及临床意义。　　方法：选取2013年6月～2015年5月在苏州大学附属儿童医院呼吸科住院治疗并符合诊断标准的支气管哮喘患儿23例，及同期住院行外科择期手术的患儿14例作为对照组，哮喘组患儿采集住院后24小时内及出院前24小时内的外周血，分为哮喘急性期组和恢复期组，对照组患儿术前采外周血。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆sB7-H3、IL-4、IFN-γ、IL-17的表达水平，分析sB7-H3与其他细胞因子的相关性。　　结果：血浆中sB7-H3和IL-4水平在哮喘急性发作期组明显升高，显著高于恢复期组和对照组（P=0.049，P<0.001），经过治疗后72.9％的患儿血浆sB7-H3和87.0%的患儿血浆IL-4水平降低，但总体水平仍高于对照组（P=0.028）；哮喘急性期患儿血浆IFN-γ水平显著降低，低于恢复期组和对照组（P=0.018，P=0.001），经过治疗后，73.9%的患儿血浆IFN-γ水平较急性期升高，但总体水平仍低于对照组（P=0.028）；血浆IL-17在三组患儿之间差异不明显（P=0.084）。治疗前后哮喘患儿血浆sB7-H3和IL-4水平升高和降低情况一致性较好（Kappa=0.596，P=0.002），而和IFN-γ、IL-17的一致性较差（Kappa=-0.232和0.055，P>0.05）。　　结论：哮喘患儿体内存在Th1/Th2的免疫失衡；sB7-H3在哮喘急性期表达异常升高；sB7-H3对Th2细胞可能存在正性调控作用。　　第二部分、B7-H3融合蛋白对小鼠哮喘模型作用的研究　　目的：研究B7-H3融合蛋白在小鼠哮喘模型中的作用；探讨B7-H3在哮喘免疫机制，特别是Th1/Th2失衡中的地位。　　方法：采购SPF级的6周龄C57BL/6小黑鼠，随机分为三组：生理盐水对照组（C组）、哮喘组（N组）、哮喘加B7-H3融合蛋白干预组（NB组）。其中N组和NB组均给予OVA致敏及激发（0、7、14天给予OVA腹腔注射致敏，22、24、26、28天分别给予OVA半小时雾化吸入），C组给予同剂量生理盐水注射和激发。此外，NB分别在0、3、7、10、14天腹腔注射B7-H3融合蛋白50μg。各组小鼠于末次激发24小时后麻醉处死，采集血浆。小鼠进行支气管肺泡灌洗，支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞总数计数及分类计数；采用ELISA法测定小鼠BALF及血浆中的IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-17的水平；小鼠肺组织切片行HE染色、PAS染色及B7-H3免疫组化，观察肺组织炎性细胞及嗜酸性粒细胞浸润情况、气道粘液分泌情况及肺组织B7-H3表达情况。　　结果：N组小鼠BALF中总细胞数和嗜酸性粒细胞比例明显高于C组小鼠（P均为0.004），NB组小鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞比例最高，显著高于N组和C组小鼠（P<0.05）；N组小鼠血浆及BALF中IFN-γ较C组降低，而IL-4、IL-5和IL-17较对照组升高（P均<0.05），NB组较N组小鼠血浆及BALF中IFN-γ、IL-4及IL-5均有不同程度的升高，而IL-17则没有显著差异（P>0.05）；肺组织病理染色显示C组小鼠肺组织无明显炎性细胞浸润及粘液分泌，N组小鼠肺组织及气道周围可见较多炎性细胞浸润，气道内可见红色酸性粘液分泌亢进，而NB组小鼠肺组织及气道周围炎性细胞浸润更为明显，气道内几乎被酸性粘液堵塞；免疫组化显示C组小鼠肺组织中几乎无B7-H3表达，N组小鼠B7-H3表达较高，NB组小鼠肺组织中B7-H3表达最高，显著高于C组和N组小鼠（P均<0.05）。　　结论：B7-H3融合蛋白能够同时上调Th1和Th2型免疫反应，加重肺组织的病理改变。　　第三部分、Toll样受体2信号对B7-H3作用的影响　　目的：揭示B7-H3与Toll样受体2（TLR2）在哮喘模型中的作用及相关性，进一步阐明B7-H3在哮喘模型中参与机体免疫炎症反应的机制。　　方法：采购SPF级的6周龄C57BL/6和TLR2-/-小黑鼠，分为五组：生理盐水对照组（C组）、野生型小鼠哮喘组（N组）、野生型哮喘小鼠加B7-H3融合蛋白干预组（NB组）、TLR2-/-小鼠哮喘组（T组）和TLR2-/-哮喘小鼠加B7-H3融合蛋白干预组（TB组）。其中N、NB、T、TB组均给予 OVA致敏及激发（0、7、14天给予OVA腹腔注射致敏，22、24、26、28天分别给予OVA半小时雾化吸入），C组给予同剂量生理盐水注射和激发。NB和TB组分别在0、3、7、10、14天腹腔注射B7-H3融合蛋白50μg。各组小鼠于末次激发24小时后麻醉处死，采集血浆。小鼠进行支气管肺泡灌洗，BALF进行细胞总数计数及分类计数；采用ELISA法测定小鼠BALF及血浆中的IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-17的水平；小鼠肺组织切片行HE染色、PAS染色及B7-H3和NF-κB免疫组化，观察肺组织炎性细胞及嗜酸性粒细胞浸润情况、气道粘液分泌情况及肺组织B7-H3和NF-κB表达情况。　　结果：T组小鼠BALF中总细胞数及嗜酸性细胞比例较C组有所升高（P分别为0.025和0.006），但显著低于N组（P均为0.004）；而TB组小鼠相比T组小鼠总细胞数和嗜酸性细胞比例也有显著升高（P分别为0.006和0.004）；T组相比N组小鼠，血浆及BALF中IL-4、IL-5显著降低而IFN-γ水平显著升高（P均<0.05），除BALF中 IFN-γ水平低于C组外（P=0.006），其余均与C组无统计学差异（P均>0.05）；TB组血浆中IL-4、IL-5及IFN-γ水平较T组均有不同程度升高；肺组织病理染色显示T组小鼠肺组织及气管周围可见炎性细胞浸润，但较N组小鼠减轻，气道内可见红色酸性粘液分泌亢进，与N组小鼠相仿，TB组较T组肺组织及气管周围炎性细胞浸润变化不明显，但气道内粘液分泌更为亢进，与NB组小鼠相仿；B7-H3免疫组化显示NB组和TB组小鼠肺组织B7-H3表达最高，显著高于其余各组（P均<0.05），其次为N组和T组小鼠，C组小鼠肺组织几乎未见B7-H3表达；NF-κB免疫组化显示C组、T组和TB组小鼠肺组织中NF-κB表达量相近，显著低于N组和NB组小鼠（P=0.004）。　　结论：TLR2受体与哮喘的发生发展密切相关，阻断TLR2途径可以显著减轻哮喘的临床症状及病理改变；哮喘模型中B7-H3产生作用并不依赖TLR2受体，至少不仅仅依赖TLR2受体。