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目的:探讨:1、原始高分子量HA(high molecular weight HA,HMW-HA)对乳腺癌细胞休眠的调控;2、肿瘤相关骨髓微环境HA代谢异常变化及对乳腺癌细胞生长的调控。方法:一、未分解代谢改变的HMW-HA对乳腺癌细胞休眠的影响:选择MDA-MB-231、MDA-MB-231BO、4T1和MCF7乳腺癌细胞。HMW-HA作用后,1、CCK-8检测生长、免疫荧光和流式细胞术分析Ki-67;2、流式细胞术检测G0/G1细胞周期;3、Western blot和流式细胞术观察P38、ERK1/2、Cyclin D1和P21cip1水平;4、免疫荧光检测3D细胞培养中Ki-67和P21cip1。二、代谢改变的HA对乳腺癌细胞生长的影响:1、骨髓基质细胞HS5与MDA-MB-231BO细胞共培养;2、化学发光方法检测HA含量;3、通过4-MU,检测HA与MDA-MB-231BO细胞生长的相关性;4、si RNA HAS2降低HS5细胞HA表达,观察MDA-MB-231BO细胞生长,确定共培养中HA的来源;5、sh RNA下调MDA-MB-231BO细胞CD44表达,观察HA-CD44的相互作用;6、流式细胞仪分选MDA-MB-231BO细胞,Western blot检测PI3K、Cyclin D1和CDK4表达;7、琼脂糖凝胶电泳检测HA分子量。三、体内实验:裸鼠为模型1、左心室注射,观察MDA-MB-231BO细胞转移性骨破坏;2、胫骨注射CRISPR敲除CD44前后的MDA-MB-231BO细胞,观察HA-CD44的相互作用。结果:一、原始HMW-HA的作用:1、抑制MDA-MB-231、MDA-MB-231BO和4T1细胞生长,维持MCF7细胞慢生长;2、延长MDA-MB-231BO、MDA-MB-231和4T1的细胞周期G0/G1期;3、降低MDA-MB-231BO细胞Ki-67的表达水平;4、升高MDA-MB-231BO细胞P-P38/P-ERK1/2的比例;5、降低Cyclin D1和升高P21cip1的表达;6、3D细胞培养环境中,抑制Ki-67和升高P21cip1的表达。二、1、MDA-MB-231BO细胞转移并发生溶骨性骨破坏;2、HS5细胞通过增加PI3K、Cyclin D1和CDK4的表达促进MDA-MB-231BO细胞生长;3、细胞共培养的HA水平明显高于HS5和MA-MB-231BO细胞单独培养;4、4-MU抑制细胞共培养环境HA对MDA-MB-231BO细胞的促生长作用;5、HA主要来自于HS5细胞;6、体内外实验中,HA通过CD44促进MDA-MB-231BO细胞生长;7、细胞共培养上清中HA为大、中和小分子量组成。结论:1、HMW-HA调控乳腺癌细胞的细胞周期,介导乳腺癌细胞生长抑制。2、肿瘤相关骨髓基质细胞微环境HA为混合分子量HA,且HA代谢异常增多,提示中、小分子量HA为骨转移性乳腺癌细胞提供利于生长的微环境。乳腺癌细胞骨转移后治疗,HA重构可能为骨转移治疗新的靶点。