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植酸酶能将肌醇六磷酸(植酸)分解成为肌醇和磷酸.在饲料中添加植酸酶可促进营养物质的利用,降低磷排出,因此对提高畜禽业生产效益及降低环境污染有重要意义.经DNA改组的三种不同重组植酸酶(phy1,phy2,phy3)用含PVDF-1400和PES-200超滤膜的超滤系统浓缩后,经AKTA Explorer纯化系统进行分离条件优化:经HiPrep_26/10 desalting脱盐柱,RESOURCE Q强阴离子交换层析以及HiPrep 16/60_Sephacryl S 200 HR凝胶层析.SDS-PAGE检验结果表明,植酸酶纯度达电泳纯,植酸酶为糖蛋白,且呈现微观不均一糖基化.质谱测得植酸酶phyl、phy2、phy3的分子量分别约为83kDa,86kDa,78kDa.经等电聚焦测定等电点范围分别集中在:4.5~3,4.7~4.2和4.7~2.4.酶学性质实验结果表明:phy1,phy2,phy3反应最适pH值分别为5.0,5.5,7.0;最适反应温度40℃,60℃,40℃;K<,m>分别为0.11mmol/L,0.1344mmol/L,0.145mmol/L;V<,max>分别为964 mmol/L·min,1037mmol/L·min和112.7 mmol/L·min.植酸酶活性不依赖任何金属离子的存在;phy2的耐热性能和pH稳定性最好:在pH1.5-7.0之间能保持70％以上的活力,70℃处理30 min酶活剩余50％以上;Cu<2+>,Zn<2+>,EDTA和SDS对三个植酸酶都有抑制作用;Ba<2+>,Ca<2+>,Mg<2+>,Fe<2+>对酶活起激活作用,其中Ca<2+>使phy2和phy3的酶活分别提高37.5％和28.5％,而Mg<2+>使phy1酶活比对照提高32.6％,当Mg<2+>浓度增加到10mmolL<-1>则对酶活性有抑制效应;向酶液中分别添加MgSO<,4>、阿拉伯糖、果糖、半乳糖、乳糖、海藻糖、蔗糖及葡萄糖(100g/L)后,植酸酶在90℃处理10min的活性比对照增加了1~3倍,说明这些物质为酶保护剂.经测定,phy1,phy2,phy3 N端氨基酸序列分别为:Ala-Val-Pro-Ala-Ser-Arg-Asp-Gln-Ser-Ser(phyl N端序列与phy2相同),Ala-Pro-Ser-Phe-Ala-Gly-Asp-Leu-Ile-Gln对植酸酶进行化学修饰的结果说明:精氨酸和色氨酸可能位于植酸酶活性中心或在其附近;而phy1中组氨酸也可能是功能基团;phy3功能基团可能含有丝氨酸或苏氨酸.该实验首次报道了用毛细管电泳测定植酸酶的pKa值,操作条件为:75μm I.D.的裸石英管;电压15KV;温度18℃;检测波长200nm、214nm;冲洗程序:甲醇正冲5分钟,反冲5分钟,水冲3分钟,碱冲5分钟,水冲3分钟,缓冲液冲5分钟.通过非线性回归,求得植酸酶pKa为7.0.该实验针对寡糖链对植酸酶理化性质的影响做了初步研究.结果表明:去糖基化后酶活降低15％;糖基化对植酸酶的分子量、等电点、最适反应pH值以及耐热性有一定的影响:寡糖链可使植酸酶对热的稳定性增强.