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猪繁殖与呼吸综合征在世界各地广泛流行,对养猪业造成了巨大的经济损失。近年来国内猪群中不断检测到欧洲型PRRSV,而且欧洲型毒株感染有上升趋势。欧洲型病毒株的感染不但可以引起猪只死亡,也能引起免疫抑制,同时还影响高致病性猪蓝耳病的防控工作。本论文以自然发病病例为基础,从病原学、病理学和分子生物学等多方面进行诊断方法的研究,并对分离毒株进行全基因测序,分析遗传变异特点,在此基础上建立PRRSV多重PCR鉴别诊断方法及间接ELISA检测方法,对辽宁地区开展欧洲型PRRSV流行情况调查,分析了发病原因并提出防控建议。用Marc-145细胞从疑似PRRS仔猪病料中分离到一株病毒,经电镜观察、中和试验、PCR鉴定和基因序列分析确定为欧洲型PRRSV(命名为LNEU12);通过仔猪感染试验对欧洲型PRRS的临诊表现、病理变化特点和病毒抗原在组织分布情况进行了全面的研究,初步建立了欧洲型PRRS的诊断方法,并证实辽宁地区存在欧洲型PRRSV。采用RT-PCR方法对辽宁分离株LNEU12的全基因序列进行分段扩增,并进行了序列分析。LNEU12毒株基因全长15083bp(不含尾部),Gen Bank登陆号为KM196101(已公布)。LNEU12毒株有8个开放阅读框,与国内外14株欧洲型PRRSV的核苷酸同源性为83.7%~93.0%,其中与欧洲型标准毒株LV同源性为90.1%,而与美洲型标准毒株VR2332株同源性仅为59.6%。与欧洲型标准毒株LV比较缺失了18个核苷酸,在NSP2氨基酸的358~359和409位点分别缺失了4个和1个氨基酸,在ORF3、ORF4基因重叠区域缺失了3个碱基。针对欧洲型毒株ORF7和美洲型毒株NSP2基因序列用Oligo 7.0软件设计2对特异性引物建立了多重PCR检测方法,该方法可以特异性扩增出欧洲型毒株、美洲型经典毒株和变异毒株的目的基因,片段大小差异在90bp以上便于电泳观察,重组质粒标准品检测下限为1.93×103拷贝。用重叠延伸PCR将欧洲型PRRSV N蛋白特异性线性抗原A、C位点的基因进行重复串联,合成186bp的DNA基因片段。采用原核表达系统将串联基因序列高效表达,获得32.8k D的重组蛋白(含GST标签),经Western-blot检测,该重组蛋白能与欧洲型PRRS阳性血清发生免疫反应,并且具有较高的特异性。用纯化后的重组蛋白包被酶标板,建立了特异性检测欧洲型PRRSV抗体的间接ELISA方法,该方法可以有效区别美洲型、欧洲型毒株的中和抗体。用建立的间接ELISA方法对辽宁地区欧洲型PRRSV进行血清学调查,结果显示个体抗体阳性率为0.51%,猪场抗体阳性率为4.55%;用多重PCR方法对57个猪场271份疑似病料进行PRRSV病原调查,美洲型变异毒株检出率为12.55%,经典毒株检出率为1.11%,欧洲型毒株检出率为为2.21%。以上结果显示,辽宁地区PRRSV的流行是以美洲型变异毒株为主,同时存在欧洲型毒株和美洲型经典毒株,欧、美毒株共存已成为辽宁地区PRRSV流行的新特点。根据分离毒株相关基因同源性比较分析,推测辽宁流行的欧洲型病毒株可能是由引种或猪只流动时带入的,并发生了一定变异而出现的欧洲型PRRSV变异毒株。根据辽宁地区欧洲型PRRS的流行特点,提出了该病的综合防控措施,为辽宁地区欧洲型PRRS的净化、预防和控制提供了参考建议。