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目的本课题旨在通过博来霉素诱导大鼠发生肺纤维化,探究自噬活性对肺纤维化的影响及其可能机制,为进一步阐明肺纤维化发病机制提供实验依据。方法将12只Wistar雄性大鼠按随机数字表法平均分为对照组(A组)和实验组(B组),每组各6只。每次将3只大鼠放入雾化装置内,雾化15分钟,根据体重换算雾化体积3-4ml,每天雾化一次,持续雾化3天,实验组雾化吸入浓度为1mg/ml博来霉素(每次剂量5mg/kg),对照组雾化吸入等量生理盐水。雾化给药后第25天进行葡萄糖耐量测定;第28天收集大鼠血清、支气管肺泡灌洗液和肺组织标本。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清胰岛素含量和支气肺泡灌洗液AMPK含量;苏木精-伊红染色(HE)观察肺组织病理改变;Masson染色法观察肺组织胶原纤维生成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺纤维化相关指标?-平滑肌肌动蛋白(?-SMA)、自噬相关标志物p62、LC3Ⅱ/Ⅰ和信号通路相关蛋白及其调控蛋白p-Akt、mTOR、p-mTOR、PTEN和OTUD3的相对表达量。结果(1)实验组和对照组大鼠体重均呈持续增长趋势,各时间点差异无统计学意义(P>0.05)。(2)实验组和对照组大鼠各时间点血糖值、糖耐量曲线下面积与空腹血清胰岛素水平差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)肺组织标本肉眼观:对照组大鼠肺组织外观呈鲜红色、光滑有光泽,触之柔软、弹性好;实验组大鼠肺组织外观颜色偏暗,缺乏光泽,肺组织部分水肿,表面可见多处散在的陈旧性出血点,质地较硬、弹性较差。(4)实验组大鼠肺湿重和肺系数均比对照组高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(5)肺组织HE染色:对照组大鼠肺组织结构基本完整、肺泡腔清晰,无或仅有轻度肺泡炎症改变;实验组大鼠肺组织正常结构遭受破坏,肺泡间隔明显增厚、变形,肺泡腔内有炎性细胞浸润,可见部分肺实质呈大片融合实变。(6)肺组织Masson染色:对照组和实验组蓝色区域面积分别为12.24±3.44 mm~2、21.77±5.92 mm~2,实验组显著高于对照组,差异具有统计学意义(F=3.489,P<0.05)。对照组主要集中在气管或血管周围,肺间质只有少量散在的点状着色,实验组蓝色区域除气管和血管周围外,肺间质可见大量蓝色着色区,呈片絮状。(7)肺纤维化相关指标:实验组?-SMA蛋白相对表达量显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(8)自噬活性相关指标:实验组p62蛋白相对表达量显著高于对照组,而LC3Ⅱ/Ⅰ比值显著低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(9)自噬调控机制:实验组p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);实验组PTEN和OUTD3相对表达量均显著低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);对照组和实验组mTOR相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);实验组AMPK含量明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论(1)雾化吸入博来霉素可诱导大鼠发生肺纤维化。(2)自噬活性在博来霉素诱导大鼠发生肺纤维化的过程中受到抑制。(3)Akt/mTOR信号传导通路异常激活与AMPK含量减少可能是自噬受到抑制的重要机制。(4)去泛素化酶OTUD3表达减少可能导致PTEN蛋白水平减低,进而导致其对Akt/mTOR信号传导通路的抑制作用减弱。