新型电化学检测联用技术及其在生物样品分析中的应用研究

来源 :华东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong514
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目前,分析化学在生命科学中的应用越来越广泛和深入。自上世纪90年代以来,特别是进入21世纪以后,生命科学研究向分子、原子水平发展,使其进入一个崭新的阶段。世界各国都将生命科学列为优先发展的领域。分析化学在研究生命过程化学、生物工程、生物医学中,在揭示生命起源、生命过程、疾病及遗传奥秘等方面具有重要意义。生命科学近年来发展的强劲势头,对分析化学在21世纪科学进步中发挥更为重要的作用提出了新的要求和挑战。为了能够实现痕量生物活性物质的实时、在体和在线分析,单一的分析技术已经不能满足现代测试的需求,因此分析方法的联用技术是今后分析化学发展的一大趋势。研究表明生物体中生物分子的含量非正常变化与很多疾病的致病机理有关[1-3]。因此,建立一种操作简便、灵敏度高的检测方法,实现对生物分子的实时、在线检测,对疾病的病理学、药理学研究具有重要的意义。本论文以新型电化学检测器的研究为重点,研制了多种化学修饰电极用于电化学检测,提高了检测的灵敏度和选择性。同时我们将液相色谱-电化学检测与微渗析取样技术联用、电化学检测与流动注射分析技术联用等,建立了在生命体系中进行采样、分离和分析的新方法,为糖尿病(diabetes)、高血压(hypertension)和帕金森氏病(Parkinson’s disease)等一些疾病的生理学、药物学及临床医学研究提供重要信息,同时对病理的研究和新药的开发也具有极为重要的意义。论文主要包括以下几个方面:1.掺铂/聚3-甲基噻吩修饰电极色谱电化学用于氨酪酸对大鼠脑纹状体中单胺类神经递质影响的研究本文探讨了外源性GABA对单胺类神经递质及其代谢产物的影响。研制了一种新型掺铂/聚3-甲基噻吩修饰电极,利用原子力显微镜(AFM)对该电极进行了表征,通过循环伏安法(CV)和微分脉冲伏安法(DPV)研究了单胺类神经递质及其代谢产物在该修饰电极上的电化学行为,结果表明:该修饰电极对单胺类神经递质及其代谢产物有显著的催化作用,电极的灵敏度高、稳定性和重现性好。在液相色谱电化学检测实验中,去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)在修饰电极上的电流响应灵敏。5种被测物的检测线性范围宽达3个数量级以上,检测限分别为2.0×10-10mol/L(NE),1.0×10-10 mol/L(DA),3.0×10-10 mol/L(DOPAC),4.0×10-10 mol/L(5-HT),7.0×10-10 mol/L(5-HIAA)。将该方法与微渗析活体取样技术联用,研究了GABA对大鼠脑纹状体中单胺类神经递质及其代谢产物的影响,取得了满意的结果。2.酶修饰双电极-流动注射同时检测人体血清中葡萄糖和胆固醇的应用研究本文研究了一种新型的化学修饰双电极作为流动注射的双电化学检测器用于人体血清中葡萄糖和胆固醇的同时测定。在双电极上同时修饰聚硫堇,壳聚糖-纳米金胶和辣根过氧化酶,然后再分别修饰上葡萄糖氧化酶(GOD)和胆固醇氧化酶(ChOx)。在-0.2V工作电位下,分别测定了TH/GNp/CH/HRP/GOx修饰电极对葡萄糖以及GNp/CH/HRP/ChOx修饰电极对胆固醇的电流响应。实验表明,修饰电极对葡萄糖和胆固醇有显著的催化作用,电极的灵敏度高,稳定性和重现性好。将该双修饰电极与流动注射分析技术相结合,可应用于同时检测人体血清中葡萄糖和胆固醇的含量,取得了满意的结果。3.铂微修饰电极-微渗析取样联用实时检测大鼠脑中乙酰胆碱和胆碱含量的研究本文研制了一种新型的微渗析取样-电化学检测装置,采用铂微电极电聚间苯二铵和酪胺固定乙酰胆碱酯酶(AChE)和胆碱氧化酶(ChO)制成ACh/Ch和Ch传感器,并与微渗析取样技术联用,实现ACh和Ch的活体检测。实验表明,通过聚合间苯二铵和酪胺可以提高生物传感器的稳定性和抗干扰能力,在与微渗析取样技术联用后,ACh/Ch传感器的检测限可达到63.0±3.4 nM ACh,50.0±1.6nM Ch,Ch传感器的检测限为25.0±1.2 nM Ch。同时,利用该微渗析取样-电化学检测装置研究了内源性神经毒素1(R),2-二甲基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉[(R)-NMSal]对乙酰胆碱和胆碱含量的影响,为帕金森氏病神经毒素致病机理研究提供了可靠的实验数据。
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