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目的:白细胞介素13(Interleukine-13,IL-13)是一种主要由激活的T淋巴细胞(Th2细胞)产生的具有多效能的免疫调节细胞因子。它可以调节炎症、黏液的产生、组织重建和纤维化。IL-13在肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、肺纤维化等纤维化疾病发病机制中起重要的作用,它通过与IL-13受体α1(IL-13Rα1)结合产生促纤维化作用,因此它是纤维化疾病治疗的重要靶点。溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid, LPA)是一种细胞膜脂类衍生物,是已知最小、最简单的甘油磷脂分子。LPA由成纤维细胞、血小板、脂肪细胞、癌细胞等分泌,是一种重要的细胞丝裂原素,它的作用多样化。它具有促进血管平滑肌收缩、促进血小板聚集等作用,也可以抑制细胞的增殖和胶原的合成。本实验主要检测IL-13是否能促进人肝星状细胞胶原的合成,溶血磷脂酸(LPA)是否能下调人肝星状细胞胶原的合成,为临床上肝硬化等纤维化疾病提供治疗的理论基础和实验依据。方法:1.台盼蓝染色检测肝人星状细胞LX-2的活性。2. HE染色观察LX-2细胞的形态。3.检测LPA刺激LX-2细胞对IL-13Rα1表达的影响。分别以不同浓度、不同时间刺激LX-2细胞,并设空白对照组,RT-PCR检测IL-13Rα1mRNA的表达。4.检测IL-13刺激LX-2细胞对Ⅰ型胶原(Procollagen typeⅠ,PCOLⅠ)、Ⅲ型胶原(Procollagen typeⅢ, PCOLⅢ)mRNA表达的影响;检测LPA刺激LX-2细胞对Ⅰ型胶原(PCOLⅠ)、Ⅲ型胶原(PCOLⅢ)mRNA表达的影响,用不同浓度LPA在不同时间刺激LX-2细胞,RT-PCR检测PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表达;然后分四组:空白组、IL-13组、LPA和IL-13混合组、LPA组,RT-PCR检测PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表达。5.免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。分四组:空白组、IL-13组、LPA和IL-13混合组以及LPA组。结果:1. LX-2细胞活性良好,而且IL-13和LPA对细胞无毒性作用。2. HE染色观察LX-2细胞为星状,细胞核呈圆形或椭圆形。3. RT-PCR检测显示,不同浓度LPA在不同时间刺激LX-2细胞,对LX-2细胞表达IL-13Rα1mRNA无影响。4. RT-PCR检测显示,IL-13刺激LX-2细胞后,PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表达上调。5. 0.1μM浓度的LPA刺激LX-2细胞6h、12h、24h时,LX-2细胞PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表达与空白对照组相比无明显变化。1μM、10μM LPA刺激24h后,LX-2细胞PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表达下降。分组实验结果显示:IL-13组PCOLI、PCOLⅢmRNA的表达均高于空白对照组,而LPA组的表达均低于空白对照组。免疫组化检测PCOLⅠ蛋白表达结果与RT-PCR结果一致。结论:1. IL-13、LPA刺激LX-2细胞对IL-13Rα1的表达没有影响。2. IL-13上调LX-2细胞PCOLⅠ、PCOLⅢ的表达。3. LPA在达到一定的浓度时下调LX-2细胞PCOLⅠ、PCOLⅢ的表达。