【摘 要】
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目的:五味子醇甲(Schisandrin A,Sch A)作为中药五味子中的主要生物活性成分,可对脑缺血再灌注大鼠产生神经保护作用。一定程度的神经元自噬可对脑缺血再灌注大鼠产生神经保护作用。本研究旨在探究Sch A是否可通过影响缺血半影区神经元自噬对脑缺血再灌注大鼠产生神经保护作用。方法:SPF级健康雄性成年SD(Sprague Dawley)大鼠,线栓法复制大鼠左侧大脑中动脉栓塞(middle
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目的:五味子醇甲(Schisandrin A,Sch A)作为中药五味子中的主要生物活性成分,可对脑缺血再灌注大鼠产生神经保护作用。一定程度的神经元自噬可对脑缺血再灌注大鼠产生神经保护作用。本研究旨在探究Sch A是否可通过影响缺血半影区神经元自噬对脑缺血再灌注大鼠产生神经保护作用。方法:SPF级健康雄性成年SD(Sprague Dawley)大鼠,线栓法复制大鼠左侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,90 min再灌注后将其随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)、Sch A低剂量组(Sch A 40μg/kg/d)、Sch A中剂量组(Sch A 80μg/kg/d)和Sch A高剂量组(Sch A 160μg/kg/d),再灌注后各Sch A给药组于左侧脑室给予相应浓度的Sch A 5μL,MCAO组予5μL相同浓度的DMSO左侧脑室注射,Sham组仅做左侧颈外动脉结扎,n=6。给药7 d后对各组大鼠进行神经功能损伤评分(modified neurological severity scores,m NSS),并进行TTC染色综合评价各组大鼠神经功能损伤程度;Western Blot检测缺血半影区自噬起始蛋白Beclin1、自噬小体标志蛋白LC3、呈递蛋白P62、膜相关蛋白LAMP1、自噬溶酶体水解酶cathepsin B以及泛素化底物ubiquitin的蛋白质表达水平变化评价用药后的自噬水平变化;免疫荧光双标法检测各组大鼠脑缺血半影区神经元自噬情况,对缺血半影区自噬做细胞定位。结果:TTC染色可见大鼠脑缺血再灌注损伤后形成脑梗死区域,根据m NSS评分评价大鼠脑缺血再灌注后出现明显神经功能损伤,当Sch A侧脑室给药后可减少其脑梗死体积(P<0.05),并降低m NSS评分(P<0.05),而此神经保护作用呈现出Sch A剂量依赖性,以Sch A 160μg/kg/d组神经保护作用最为明显。Western Blot结果显示,大鼠脑缺血再灌注后自噬启动蛋白质Beclin1及自噬小体形成标志LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平增加(P<0.05),但cathepsin B表达水平降低,同时P62及ubiquitin的表达水平升高。Sch A侧脑室给药后与MCAO组相比较,Beclin1及LC3Ⅱ/Ⅰ表达量增加,且Sch A显著升高cathepsin B表达水平的同时降低了P62及ubiquitin的表达量,各剂量组间以Sch A高剂量组差异显著(P<0.05)。LAMP1在给药后仅表现出表达升高趋势,但无显著差异(P>0.05)。免疫荧光双标法结果显示,与Sham组相比,MCAO组大鼠脑缺血半影区LC3表达增加,且主要呈现于神经元。与MCAO组相比较,Sch A给药后缺血半影区神经元LC3表达增加(P<0.05),以Sch A 160μg/kg/d组LC3表达增加明显。结论:Sch A通过减轻脑缺血再灌注大鼠神经功能损伤、降低其脑梗死体积,对大鼠产生神经保护作用。Sch A的作用机制是通过调控大鼠脑缺血半影区神经元自噬,逆转自噬相关蛋白质表达水平产生。
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