本试验利用响应面分析法优化含活性肽CC34毕赤酵母重组菌的冻干保护剂组合配方,以使活性肽CC34为介导的毕赤酵母重组菌冻干粉具备性能稳定、货架期长、易于运输等特点。本试验通过单因素试验筛选出对CC34毕赤酵母重组菌体存活率有最好保护效果的三种保护剂。以保护剂种类为响应面的因素,不同的浓度为水平,利用Box-Behnken法建立CC34毕赤酵母重组菌存活率回归方程,分析三种保护剂组合对菌体存活率的效应关系。并研究优化真空冷冻干燥过程中冻干工艺条件,制备以活性肽CC34为介导的毕赤酵母重组菌冻干粉。将活性肽CC34毕赤酵母重组菌冻干粉置于不同温度、时间下储存测定其存活率。研究主要结果如下:（1）通过测定菌种遗传稳定性结果表明,活性肽CC34毕赤酵母重组菌传代至第5代时,目的基因序列未发生改变,鉴定后仍是活性肽CC34,在第10代时有部分基因发生突变的现象。根据绘制的生长曲线可知,后续冻干菌种试验选择18 h作为收集菌体的时间。活性肽CC34毕赤酵母重组菌的最优离心条件为4 000 r/min,20 min,菌体存活率为93.63%。（2）通过对预冻温度、菌泥与保护剂混合比例的优化,最终确定预冻温度为-20℃预冻3 h,按照菌泥:保护剂为1:2的比例进行添加冻干保护剂。利用所选择的溶剂作为冻干活性肽CC34毕赤酵母重组菌的保护剂,最终通过单因素筛选试验结果得出:脱脂乳粉浓度为10%、海藻糖浓度为15%、山梨醇浓度为20%、谷氨酸钠浓度为3%、蔗糖浓度为10%、甘油浓度为9%。选择单因素试验保护效果较好的三种保护剂作为复合响应面的因素,最终得出使活性肽CC34毕赤酵母重组菌冻干存活率最高的配方为脱脂乳粉10.75%、海藻糖15.70%、山梨醇20.19%,在此条件下预测到的菌体存活率为77.00%。当菌泥与复合保护剂混合平衡时间为45 min时,酵母菌体达到最高存活率81.84%。（3）按照最优条件制备活性肽CC34毕赤酵母重组菌冻干菌粉,通过储藏试验发现4℃条件下的储存效果较好,储存90 d后的菌体冻干存活率为（72.69±1.12）%。经过抗性培养基和PCR验证储存90 d后的冻干菌粉,结果表明冻干菌粉具有一定的储存稳定性。根据响应面设计最终得出使活性肽CC34毕赤酵母重组菌冻干存活率最高的配方为脱脂乳粉10.75%、海藻糖15.70%、山梨醇20.19%,结合以上最优条件可使菌体存活率达到81.84%。活性肽CC34毕赤酵母重组菌在冻干粉状态下、4℃条件下储存90 d后的菌体冻干存活率为72.69%。