论文部分内容阅读
天然免疫是宿主防御病原微生物入侵的第一道防线。宿主细胞通过种系编码的病原识别受体监测病原相关分子,以激活宿主的天然免疫应答。这一机制在保护宿主对抗病原微生物方面至关重要,并可通过激活抗肿瘤免疫响应抑制肿瘤的发展。本论文优化了环二核苷酸及其类似物的生物活性分析方法,对环二核苷酸的脱氧类似物、虚拟筛选的部分天然产物等进行相关生物活性评价,相关活性结果为靶向干扰素刺激因子（Stimulator of interferon genes,STING）的抗肿瘤免疫治疗新药研究提供了有用的信息。我们对8种天然环二核苷酸及其脱氧类似物进行生物活性测试。首先,我们选用人源巨噬细胞THP1-Dual TM和鼠源巨噬细胞RAW-Lucia TM ISG测试了这些环二核苷酸及其类似物激活STING-IRF通路情况;然后,我们使用健康人血模拟体内环境检测细胞因子的产生对THP1-Dual TM细胞STING-NF-κB通路的激活情况。细胞实验结果显示在RAW-LuciaTM ISG细胞中,2’,3’-c Gd AMP、2’,3’-cd Gd AMP、3’,3’-cd GAMP和3’,3’-cd Gd AMP对RAW-Lucia TM ISG细胞STING-IRF通路激活的效果较好。其中2’,3’-c Gd AMP和2’,3’-cd Gd AMP与天然环二核苷酸2’,3’-c GAMP相比以及3’,3’-cd GAMP和3’,3’-cd Gd AMP与天然环二核苷酸3’,3’-c GAMP相比作用效果有显著提高。在THP1-Dual TM细胞中,2’,3’-cd GAMP和2’,3’-c Gd AMP作用效果优天然环二核苷酸2’,3’-c GAMP。3’,3’-cd Gd AMP与天然的环二核苷酸3’,3’-c GAMP相比,其作用效果高达3.8倍。与天然的环二核苷酸3’,3’-c GAMP相比,3’,3’-cd GAMP和3’,3’-c Gd AMP作用效果明显增强。在人血实验中,2’,3’-cd GAMP对促进血细胞IFN产生并激活THP1-Dual TM细胞STING-IRF通路作用效果最好。已知3’,3’-c-di-GMP可以控制生物膜形成,并且我们合成的环二核苷酸类似物与3’,3’-c-di-GMP有相似的结构,因此我们考察了其他环二核苷酸类似物对细菌生物膜形成的影响。我们选取2’,3’-cd GAMP,2’,3’-c Gd AMP,3’,3’-c Gd AMP和3’,3’-cd Gd AMP四种化合物对铜绿假单胞杆菌进行生物膜生长的研究。研究发现四种化合物均没有抑菌作用,但值得注意的是2’,3’-c Gd AMP和3’,3’-cd Gd AMP对生物膜形成有影响,虽不具浓度依赖性,但当浓度高于80μM时,抑制作用逐渐消失。与此同时,我们选取分子动力学模拟虚拟筛选出与STING蛋白晶体模型结合打分最高的24种化合物,进行细胞测试。测试结果显示,胭脂红对RAW-Lucia TM ISG细胞STING-IRF通路激活的EC50值为30.83μM;化合物1,3,5-三咖啡酰奎宁酸对RAW-LuciaTM ISG细胞STING-IRF通路的激活呈现负趋势。最后我们选取可以表达h STING蛋白的大肠杆菌来制备h STING蛋白,拟采用ITC、MST等技术研究24种化合物和本课题组合成的目标分子与h STING的亲和力,该实验正在进行中。