论文部分内容阅读
背景与目的：近几年发现的新一代化疗药(紫杉醇、多西紫杉醇、健择和诺维本)与铂类联合的双药化疗是目前晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的一线标准治疗方案。虽然疗效肯定,但存在两个问题：1、治疗效果已经达到了一个平台,疾病控制率为40％左右,1年生存率30-40％；2、对肿瘤组织的选择性不强,多伴有明显的毒副反应,限制了它们在老年及身体状态较差患者中的应用。因此,寻找高效、低毒的抗癌药成为医学界面临的课题。近年,以吉非替尼为代表的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)等多种分子靶向药物已应用于NSCLC治疗,可以延长患者生存期和疾病进展时间,改善症状。分子靶向药物的优点是低毒性,缺点是有效率不高。鉴于分子靶向药物的作用机制与化疗药物不同,理论上将吉非替尼与这类药物联合应用应该会产生协同作用,但临床试验却发现吉非替尼与紫杉醇/卡铂或健择/顺铂同时使用治疗晚期NSCLC时,对比化疗并无临床获益。如何使EGFR-TKIs与上述化疗药联合使用产生增效作用是目前的研究热点。基础研究发现对膀胱癌细胞,吉非替尼和化疗的联合应用是否有协同抑瘤作用与给药次序有关[1]。本实验观察吉非替尼与紫杉醇、多西紫杉醇及培美曲塞以不同方式联合应用对人肺腺癌细胞SPC-Al生长及细胞周期的影响,探索它们联合序贯用药是否比单药化疗更有效及其可能的细胞学机制。
方法:RT-PCR法和Westernblotting法检测SPC-Al细胞及A549细胞中EGFRmRNA和EGFR蛋白表达；四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dime thylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]显色分光光度法测细胞增殖；流式细胞术测细胞周期。分别观察化疗药物与吉非替尼单独、同时及间隔24小时序贯作用。
结果:SPC-Al细胞及A549细胞中有EGFRmRNA及EGFR蛋白表达,且SPC-Al细胞中其表达量均呈过表达；在10-13M～10-6M(吉非替尼、紫杉醇、多西紫杉醇)和10-12M-10-5M(培美曲塞)浓度范围内,吉非替尼与化疗药物均明显抑制SPC-Al细胞生长,作用呈浓度依赖性和时间依赖性,IC50分别为：2.6nM(多西紫杉醇)、19.6nM(紫杉醇)、61.2nM(吉非替尼)和27.1nM(培美曲塞)。四种药物在IC50浓度下均作用96h时对SPC-Al生长达最大抑制效果。吉非替尼与化疗药物联合作用对细胞生长的影响与给药的次序有关：跟单药组相比,同时给药或先用吉非替尼后用化疗药(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)组对抑制细胞生长无显著增强作用(P>0.05),先用化疗药(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)后用吉非替尼组对抑制细胞生长有明显增强作用(P<0.05)。
细胞周期研究显示：化疗药(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)和吉非替尼作用于不同的细胞周期。紫杉醇和多西紫杉醇将SPC-A1细胞阻滞于G2期,培美曲塞将细胞周期阻滞在S期而吉非替尼将SPC-A1细胞阻滞于G1期。先用吉非替尼后用紫杉醇或多西紫杉醇组G1期细胞显著增多(P<0.05),而G2期细胞显著减少(P<0.05)。先用吉非替尼后用培美曲塞组G1期细胞显著增多(P<0.05),S期和G2期细胞显著减少(P<0.05)。先用紫杉醇或多西紫杉醇后用吉非替尼组G2期细胞显著增多而G1期细胞显著减少(P<0.05)。先用培美曲塞组后用吉非替尼组G1期细胞显著减少(P<0.05),而S期细胞显著增多(P<0.05)。
结论：化疗药物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)和吉非替尼都能抑制SPC-A1细胞生长,化疗药物与吉非替尼联合作用对细胞生长的影响与给药次序有关,同时给药或先用吉非替尼后用化疗药物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)对抑制细胞生长无显著增强作用,先用化疗药物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)后用吉非替尼对抑制细胞生长有明显增强作用。同时给药或先用吉非替尼后用化疗药物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)对抑制细胞生长无显著增强作用可能与它们对细胞周期的影响相关,先用化疗药物(紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞)后用吉非替尼对抑制细胞生长的增强作用可能与对细胞周期的影响无关。