论文部分内容阅读
目的:研究锰对人群和SH-SY5Y细胞中PARK2表达的影响。方法:⑴人群研究:选取铁冶炼厂的20名工人为对照组,锰铁合金冶炼厂的26名工人为锰暴露组。收集工人的血液和唾液,采用原子吸收分光光度法（atomic absorption spectrometry,AAS）测定锰和铁（iron,Fe）的浓度;实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PARK2 mRNA表达水平。⑵SH-SY5Y细胞实验:0、100、300、500μM浓度的MnCl2染毒SH-SY5Y细胞24小时后,用MTT法测细胞存活率（线粒体损伤）,AAS测定细胞内锰浓度,高度水溶性四唑盐（WST-1）法测定细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力,硫代巴比妥酸法（thibabituric acid,TBA）测定细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,反相高效液相（reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）-荧光法测定细胞内多巴胺（dopamine,DA）含量,RT-PCR检测PARK2 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测Parkin蛋白表达水平。结果:⑴人群研究:与对照组比较,锰暴露组血浆、红细胞（red blood cell,RBC）、唾液和累积锰暴露的锰浓度分别高出2.2,2.0,1.7和3.0倍（P<0.05）,锰暴露组血液中PARK2 mRNA的表达降低42%（P<0.05）。相关性分析显示,PARK2mRNA的表达与血浆、RBC、唾液以及累积锰暴露的锰浓度呈负相关,r值分别为-0.526（P<0.05）、-0.317（P<0.05）、-0.652（P<0.05）、-0.737（P<0.05）。⑵SH-SY5Y细胞实验:与对照组比较,MnCl2浓度为300、500μM时,细胞存活率降低（P<0.05）。与对照组比较,染锰组细胞内锰浓度增高（P<0.05）。与对照组比较,MnCl2浓度为300、500μM时,SOD活力和DA含量降低（P<0.05）,MDA含量升高（P<0.05）;细胞PARK2 mRNA表达和Parkin蛋白表达降低（P<0.05）。相关性分析显示,PARK2 mRNA表达与线粒体损伤、细胞内锰含量、MDA含量呈负相关,r值分别为-0.902,（P<0.05）、-0.880（P<0.05）、-0.862（P<0.05）;PARK2 mRNA表达与SOD活力、DA含量、Parkin蛋白表达呈正相关,r值分别为0.879（P<0.05）、0.859（P<0.05）、0.809（P<0.05）。结论:1锰暴露工人血液中PARK2 mRNA表达下降,并与血浆、RBC、唾液以及累积锰暴露的锰浓度呈负相关。2锰暴露引起SH-SY5Y细胞线粒体损伤、氧化应激、DA分泌减少和PARK2表达下降。