目的:(1)通过体外抗细粒棘球绦虫原头蚴筛选,推测可用于抗包虫病筛选的靶点。(2)体外筛选得到的药物,进行动物实验找到一个或几个对感染E.g小鼠有疗效的药物。(3)体外筛选结合动物体内药效实验,建立可行的抗包虫病筛选平台。方法:(1)378种激酶抑制剂终浓度为5 μM杀伤细粒棘球绦虫原头蚴,亚甲基蓝染色后筛选原头蚴死亡率达到95%药物。其次将药物浓度降低到1μM,亚甲基蓝染色后统计原头蚴死亡率,选择原头蚴死亡率较高的药物。最后通过系列浓度杀伤原头蚴实验,分析药物杀伤原头蚴的半数致死浓度(LC50),选择体外杀伤细粒棘球绦虫原头蚴最佳的药物。(2)建立BABL/c小鼠继发感染细粒棘球蚴模型,剖解感染6个月小鼠,选择直径范围在5～10 mm包囊,进行药物体外杀伤包囊实验。(3)选择体外杀伤原头蚴及包囊最佳的药物,通过灌胃给药方式评价感染细粒棘球小鼠体内药效实验,观察小鼠血常规、肝脏肾脏功能及电解质指标变化,脏器称重分析脏器变化,病理检查分析小鼠肝脏、肾脏及脾脏结构变化,评价药物安全性指标。评价包囊湿重、包囊死亡率及包囊透射电镜分析超微结构变化,评价药物药效指标。结果:本研究所选用的小分子激酶抑制剂库,包含378种化合物(作用靶点达到59种)。(1)378种激酶抑制剂浓度在5 μM进行首次筛选,通过亚甲基蓝染色统计原头蚴死亡率,发现共有51种激酶抑制剂对应原头蚴的死亡率≥95%。这51种激酶抑制剂中有7个药物在浓度为1 μM对细粒棘球绦虫原头蚴仍然有较好杀伤效果。其中有一种药物是去泛素化激酶抑制剂-DUB杀伤率为100%,提示DUB可能是细粒棘球绦虫原头蚴体外药物杀伤的重要靶点。系列浓度的7种药物对原头蚴杀伤实验表明,S2243(Degrasyn)和S2895(Tyrphostin9)杀伤细粒棘球绦虫原头蚴半数死亡浓度均为LC50=2.5 μM。(2)解剖感染6个月小鼠,选取直径5～10 mm包囊,S2243和S2895终浓度为20 mg/mL,体外培养3 d后包囊死亡率达到60%。(3)继发感染细粒棘球绦虫3个月小鼠,灌胃给药4周后,S2895≤15 mg/kg小鼠血常规、电解质及肝功能肾功能指标均无明显变化,且小鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏重量均无明显变化,肝脏和肾脏病理检查也无明显变化,药效结果显示:S2895剂量为15 mg/kg时,包囊死亡率较溶剂组明显提高(P<0.05),包囊超微结构显示S2895 10 mg/kg和15 mg/kg的活包囊空泡状细胞增多,脂滴聚集等,包囊死亡。但灌胃给药S2895 10 mg/kg和15 mg/kg小鼠体内包囊湿重无明显变化。结论:(1)本次试验表明激酶对细粒棘球绦虫的生长极为重要,不同的激酶抑制剂作用效果不同。DUB可能是细粒棘球绦虫原头蚴药物筛选的重要靶点。(2)S2243和S2895对细粒棘球绦虫包囊体外杀伤作用效果明显,包囊死亡率达到60%。(3)S2895对感染细粒棘球绦虫小鼠体内包囊生长有明显抑制和杀伤作用。