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目的
运用串联质谱法蛋白质组技术,使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳或液相色谱分离蛋白后进行串联质谱鉴定和数据分析,鉴定和分析成年男性正常晶状体纤维蛋白质,建立其蛋白质数据库和表达谱,为研究晶状体相关疾病提供基础。
方法
本实验首次采用组合的蛋白质组方法,鉴定人晶状体中的全部纤维蛋白质。一种方法:晶状体纤维总蛋白质通过聚丙稀酰胺凝胶电泳初步分离、胶内酶切后的多肽利用反相液相色谱串联质谱的方法,对晶状体中的全部纤维蛋白质进行鉴定;另一种方法:晶状体蛋白质混合物被尿素溶解后,做成凝胶块,胶内酶切后的多肽通过二维液相色谱串联质谱的方法,鉴定晶状体中的全部纤维蛋白质。
结果
串联质谱应用AMASS软件进行质量控制筛选,同时应用反向数据库搜索法评价假阳性率结果,具有可信度在97.8%以上、具有2个或2个以上合格谱图的蛋白质作为阳性鉴定结果,两种实验方法共鉴定121个蛋白质。
结论
该研究首次全面系统的建立了成年男性晶状体纤维蛋白质数据库,实验结果为以后研究晶状体蛋白质随年龄及白内障形成过程中的变化提供了实验方法和数据。
目的
运用双向电泳和基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的实验方法,鉴定年龄相关性白内障和正常晶状体之间差异表达的蛋白质。
方法
用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分别分离16例年龄相关性白内障和正常晶状体之间的总蛋白质,各自建立二维电泳图谱,再利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析以及数据库搜索相结合对部分差异表达的蛋白质点进行鉴定。
结果
双向电泳凝胶图显示年龄相关性白内障和正常晶状体共有84个差异点,其中52个上调表达,32个下调表达。有和无的差异表达点10个,表达量相差三倍以上差异表达的点10个。利用MALDI-TOF-MS对差异表达的15个蛋白质点进行肽指纹图谱分析,经数据库检索后鉴定出 5 个差异蛋白质。
结论
年龄相关性白内障和正常晶状体之间蛋白质表达存在差异,实验结果为年龄相关性白内障的基础研究提供依据和探索新的实验方法。