【摘 要】
：
目的:各种来自机体内外环境中的损伤因素,如机体代谢产生的活性氧、紫外线、电离辐射、基因毒性药物等均能引发基因组DNA的结构性损伤、拷贝数变化、表达调控紊乱等。为了对抗这些不利因素的影响,细胞在长期进化过程中,形成了一整套完备的包括损伤监视、周期调控、损伤修复、凋亡诱导等在内的DNA损伤应答机制。这种DNA损伤应答是维持基因组稳定性的基石。Tudor-SN蛋白是一种细胞内广泛表达的多功能蛋白,其不仅
论文部分内容阅读
目的:各种来自机体内外环境中的损伤因素,如机体代谢产生的活性氧、紫外线、电离辐射、基因毒性药物等均能引发基因组DNA的结构性损伤、拷贝数变化、表达调控紊乱等。为了对抗这些不利因素的影响,细胞在长期进化过程中,形成了一整套完备的包括损伤监视、周期调控、损伤修复、凋亡诱导等在内的DNA损伤应答机制。这种DNA损伤应答是维持基因组稳定性的基石。Tudor-SN蛋白是一种细胞内广泛表达的多功能蛋白,其不仅作为STAT6等多种转录因子的共激活因子,而且还参与pre-mRNA剪接加工过程、应激颗粒的形成等。值得注意的是,近年陆续有研究报道,Tudor-SN蛋白可以被PARP-14、CoaSt6等多聚ADP核糖聚合酶家族蛋白修饰,发生多聚ADP核糖基化修饰。多聚ADP核糖基化修饰是一种涉及到基因组稳定、转录和能量代谢等方面,与DNA损伤修复密切相关的蛋白翻译后修饰。我们实验室通过质谱检测发现,Tudor-SN蛋白可以和PARP-1蛋白相互结合,本课题的主要目的是在现有的研究基础上,探讨Tudor-SN蛋白在DNA损伤应答过程可能发挥的潜在作用并试图探讨其作用机制。方法:本课题分五部分进行,第一部分研究Tudor-SN蛋白与DNA损伤修复蛋白的相互作用。该部分主要从两方面研究:1、采用质谱技术,检测到Tudor-SN蛋白钓取的蛋白复合物中含有PARP-1蛋白;2、利用免疫共沉淀实验和GST-pulldown的方法分别检测细胞内外Tudor-SN蛋白和PARP-1等DNA修复蛋白的结合情况。第二部分,利用免疫共沉淀实验检测Tudor-SN蛋白在DNA损伤应答中的蛋白质翻译后修饰。第三部分,观察Tudor-SN蛋白对细胞凋亡敏感性的影响。该部分主要从三方面研究:1、采用流式细胞分析检测DNA损伤应答过程Tudor-SN蛋白对细胞凋亡率的影响。2、利用免疫印迹法、免疫共沉淀实验对凋亡标志物进行检测。3、通过克隆形成实验观察Tudor-SN蛋白对细胞增殖能力的影响。第四部分,探讨Tudor-SN蛋白在DNA损伤应答过程中对表观遗传调控的影响。该部分主要从两方面研究:1、采用免疫印迹法、H2AX活化双重染色法、细胞免疫荧光染色技术观察Tudor-SN蛋白影响H2AX的磷酸化修饰;2、利用免疫印迹法、染色体松弛实验及免疫共沉淀实验探索Tudor-SN蛋白如何影响组蛋白乙酰化修饰。第五部分,通过免疫印迹法和免疫共沉淀实验研究Tudor-SN蛋白对ATM蛋白激酶途径磷酸化通路的影响。结果:1.质谱检测Tudor-SN蛋白可以钓取PARP-1蛋白;Tudor-SN蛋白与PARP-1、XRCC1、DNA Polymerase beta等DNA损伤修复蛋白可以在细胞内结合;Tudor-SN蛋白与PARP-1蛋白可以在细胞外结合。2.Tudor-SN蛋白在DNA损伤应答过程中可以发生磷酸化、多聚ADP核糖化以及泛素化等蛋白质翻译后修饰。3.敲除Tudor-SN蛋白导致细胞凋亡率升高,凋亡标志物的激活增加以及细胞增殖能力显著受抑,细胞活力明显下降。4.Tudor-SN蛋白在DNA损伤应答过程中影响H2AX的磷酸化修饰;Tudor-SN蛋白促进H3K9ac的表达;随着DNA损伤进程,Tudor-SN蛋白能够募集到更多的组蛋白乙酰基转移酶Gcn5;敲除Tudor-SN蛋白导致细胞染色体结构不能有效松弛,不利于DNA损伤的修复。5.Tudor-SN蛋白能够促进ATM蛋白激酶的磷酸化及其介导磷酸化通路的激活;Tudor-SN蛋白影响ATM蛋白激酶和NBS1蛋白的结合。结论:1.Tudor-SN 蛋白能够和 PARP-1、XRCC1、DNA Polymerase beta、ATM 等多种DNA损伤修复蛋白相互结合,形成动态变化的复合体,共同发挥作用。并且在DNA损伤应答过程中,Tudor-SN蛋白可以发生不同的翻译后修饰,各种翻译后修饰形式相互影响、相互协调,通过动态的蛋白质翻译后修饰来实现对外界环境的各种应答。2.Tudor-SN蛋白影响细胞凋亡敏感性,Tudor-SN蛋白的缺如会导致细胞的凋亡率明显增高,细胞增殖能力显著受抑,细胞活力明显下降。3.DNA损伤应答过程中,Tudor-SN蛋白影响组蛋白修饰,促进H2AX发生磷酸化修饰;Tudor-SN蛋白通过募集组蛋白乙酰转移酶Gcn5促进H3K9ac的表达,进而影响染色体结构的改变。4.Tudor-SN蛋白促进ATM及其介导的磷酸化通路的激活。
其他文献
杨巍针对克罗恩肛瘘主张从脾论治,灵活运用"消、托、补"三法,通过中医药干预缩短到达手术时机的时间,提高手术疗效及改善患者生活质量。同时提出"术前精准定位、术中微创护肛、术后中医药康复"三位一体的综合诊疗方案。术前采用肛周磁共振成像（MRI）实现精准定位;术中总结出"常中有变、顺势而为、顺藤摸瓜、步步为营"的十六字治则,根据患者瘘管的不同位置形态选择不同术式;术后运用中医药内外兼治,擅用实炎方、虚炎
目前,在血液系统的恶性肿瘤中,多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma,MM）的发病率排名第二,近些年来,随着硼替佐米、来纳度胺等药物的研发明显延长了患者的生存期,有些治疗效果比较好的患者生存期甚至可以超过10年。已经有研究证明很多类型的肿瘤,包括MM的发生发展与基因组的的不稳定性有着很大的关系[1]。其中,在DNA损伤修复的过程中,核酸内外切酶起着非常重要的作用,一旦核酸内外切酶基因发生突
血氧水平依赖功能磁共振成像（Blood-oxygen-level-dependent functional magnetic resonance imaging,BOLD fMRI）可用于检测骨骼肌的血流动力学及代谢特征,然而目前已有的研究成果中缺乏其在低强度运动模型下外周动脉粥样硬化性疾病（peripheral arterial disease,PAD）病人中应用的相关数据。本研究采集了12位健
研究背景恶性淋巴瘤是国人常见恶性肿瘤之一。弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是恶性淋巴瘤中最常见的类型,化疗是治疗的主要手段。多数的DLBCL患者经标准化疗方案治疗后可以缓解,但是25～30%的DLBCL患者对化疗药物耐药,属于难治性DLBCL,尤其是活化B细胞（ABC）型DLBCL（ABC-DLBCL）,是目前临床上治疗的难点。细胞分裂周期相关蛋白激酶7（CDC7）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,通过磷
目的:缺血性心脏病（ischemic heart disease,IHD）的致死率居全球之首。心肌组织缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤诱导了缺血区心肌梗死。深入研究I/R损伤的病理生理过程,有效保护心肌组织,降低IHD病人死亡率尤为重要。微囊泡（microvesicles,MVs）作为细胞激活或凋亡过程中产生的生物活性物质,在IHD的发生发展中扮演重要角色。本研
目的肝细胞癌（简称肝癌）是中国第三恶性肿瘤死因,术后复发是制约患者长期生存的主要原因。肝癌干细胞被认为是肝癌复发的根源之一,近年来受到重视。本课题研究肝癌干细胞的分离、细胞生物学特性、药物抵抗及在趋化因子CXCL12介导下迁移特性,为防治肝癌复发提供新思路。方法根据肿瘤干细胞能够将胞核染料Hoechst33342排出细胞的特点,采用流式细胞仪分选肝癌细胞系HepG2及21例新鲜人肝癌组织中SP细胞
研究背景沙利度胺做为免疫调节药物（IMiDs）,已经成为多发性骨髓瘤等血液学恶性肿瘤免疫治疗和维持治疗的最重要药物之一。其联合化疗应用于实体瘤的抗癌治疗也取得相当的效果。目前沙利度胺的抗癌机理主要是作用于肿瘤微环境,增强内源性肿瘤相关抗原的免疫监视功能,募集功能性T细胞向肿瘤区域移动,同时激活T淋巴细胞活化过程,通过细胞毒性T淋巴细胞细胞毒作用,增强机体对肿瘤细胞的免疫反应。《科学》杂志上于201
高速公路在建设过程中,土石方的开挖产生了大量路堤、路堑边坡,导致地表裸露、水土流失、生态环境破坏等问题。近年来,随着环境保护意识的逐渐加强,路基边坡绿色柔性防护体系建设得到了迅猛的发展。由于根-土之间相互作用的复杂性,绿色柔性防护体系的设计计算主要停留在经验模型与定性分析上,理论基础远远落后于工程建设的发展。基于此,本文主要以植物根系力学、水力两个方面作用为切入点,通过单根拉伸与直剪试验定量分析了
背景LIM和SH3蛋白-1（LASP-1）是连接LIM和SH3结构域的第一个蛋白,并且有两个伴肌动蛋白样重复,主要聚集在细胞的粘着斑,伪状足的前缘以及丝状伪足的密集处,可以启用细胞粘附,迁移和蜂窝通信等重要功能。LASP-1蛋白在许多实体肿瘤组织中呈现高表达,更为重要的是,高表达的LASP-1与肿瘤的恶性功能密切相关,例如:增殖、侵袭和转移等。目前LASP-1作为一种新的肿瘤转移相关蛋白。我们在前
[目的]双链RNA切割对于许多真核和原核RNA的成熟和降解至关重要。RNase Ⅲ家族主要负责这些双链RNA的切割,并且参与双链RNA的加工过程,而RNase Ⅲ正是通过这种方式参与了细胞的多种代谢活动。这个家族主要分为三大类。而卡介苗RNase Ⅲ则属于其中的第一大类。在研究中,我们尝试采用多部纯化的方式来获得可以用于RNA切割反应的高纯度重组酶,并利用双链RNA底物对该重组RNase Ⅲ的生物