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人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)是人体内一种十分重要的多肽类生长因子,微量的hEGF能强烈地促进细胞的分裂和生长。hEGF在保护消化道上皮细胞及修复粘膜细胞中发挥巨大作用。hEGF分泌不足的人群容易发生口腔、食道、胃及十二指肠溃疡。目前临床上应用的治疗溃疡的药物疗效显著,但在一部分患者中,溃疡愈合不够完美,形成所谓的红疤(red scar),更有甚者在服药1年后仍不能愈合。对此类病人联合服用hEGF却能收到理想的治疗效果。hEGF转基因番茄口味香甜,易种植,产量高,作为上消化道保健及溃疡防治食品药物有良好的前景。 根据番茄偏爱的密码子合成了能在植物中表达的基因序列。实验证明该基因能在番茄中表达,也能在大肠杆菌中高效融合表达,表达产物有良好的生物活性。本研究的主要结果如下: 1 依据番茄密码子的偏爱性,设计并人工合成了hEGF基因序列; 2 构建了p2300-35S-hEGF和p2300-2A11-hEGF两个植物表达载体; 3 建立了樱桃番茄cg2001-14的遗传转化体系; 4 分子检测证明hEGF基因成功整合到番茄的基因组中; 5 放射免疫法检测证明hEGF在转基因果实中成功表达; 6 转基因番茄对酒精引起的急性胃溃疡模型动物有明显的防治效果; 7 构建了pGEX-4T-1-hEGF表达载体,实现了GST-hEGF融合蛋白在原核生物中的高效表达。纯化得到具有生物活性的、高纯度的目的蛋白; 8 构建了pPTD-hEGF表达载体。实现了融合蛋白PTD-hEGF在原核生物中的高效表达。纯化得到纯度较高的目的蛋白,PTD可引领hEGF穿过细胞膜进入细胞内,表现出了良好的生物活性。